Obtención de un cultivo de células gliales mixtas a partir de un cerebro de ratón neonatal

Comience con un cerebro de ratón neonatal y transfiéralo a un tubo que contenga una solución de enzima proteolítica.

Las enzimas degradan la matriz extracelular del tejido e inician la disociación celular.

Lave repetidamente el tejido digerido con un medio de cultivo para eliminar las enzimas.

Utilice una pipeta de mayor diámetro para mover el tejido repetidamente a través de la pipeta para disociarlo en fragmentos más pequeños.

Luego, usando una pipeta de menor diámetro, continúe disociando los fragmentos, creando una suspensión celular.

Filtre esta suspensión para eliminar los grupos celulares y obtener una suspensión unicelular que contenga neuronas primarias y una población mixta de células gliales, incluidas la microglía y los astrocitos.

Sembrar las células en un matraz de cultivo que contenga un medio de crecimiento e incubar para promover su adherencia.

Con el tiempo, la ausencia de factores de crecimiento neuronal en los medios provoca la muerte neuronal.

Reemplace los medios gastados con medios nuevos. Las células gliales utilizan los nutrientes y proliferan, generando un cultivo glial mixto de astrocitos y microglía.

Transfiera el cerebro a un tubo de 50 mililitros que c