Aislamiento de poblaciones celulares del tejido cerebral mediante la clasificación de núcleos activados por fluorescencia

Transfiera un trozo de tejido cerebral humano fresco congelado a un molinillo adecuado que contenga tampón de lisis fría.

Mueva el mortero hacia arriba y hacia abajo para romper mecánicamente el tejido, liberando las células.

Las moléculas de detergente en el tampón de lisis rompen la membrana celular, liberando los núcleos.

Transfiera el contenido a un tubo de centrífuga adecuado y agregue tampón de sacarosa fría al fondo del tubo, creando un gradiente de densidad.

Centrifugar a alta velocidad para separar los núcleos en el fondo del tubo.

Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender los núcleos en una solución salina tamponada.

Agregue anticuerpos conjugados con fluoróforos específicos de la diana a los núcleos e incube para permitir que el anticuerpo se una a su proteína nuclear diana.

Agregue tinción nuclear para visualizar el ADN intacto.

Realice la clasificación de núcleos activados por fluorescencia para clasificar los núcleos de diferentes poblaciones celulares en función de distintas señales de fluorescencia.

Comience a diseccionar aproximadamente de 200 a 400 miligramos de tejido de una muestra de tejido de corteza adulta humana fresca y congelada. Coloque el pañuelo en u