Obtención de rodajas de cerebelo a partir del cerebro de un pollito embrionario

Tome un huevo de gallina fertilizado en una etapa adecuada de desarrollo.

Corta la cáscara para acceder al embrión.

Localice y diseccione la cabeza, luego transfiérala a una placa de Petri que contenga tampón de fosfato enfriado.

Retire los ojos y las mandíbulas.

Separe la piel de la superficie del cráneo.

A continuación, corte y retire los huesos del cráneo.

Limpie el tejido conectivo circundante para exponer el cerebro.

Separa el prosencéfalo.

Luego, separe el cerebelo del cerebro posterior y el vaso sanguíneo.

Transfiera el cerebelo a un tampón de sal frío.

El cerebelo embrionario contiene una capa de células progenitoras neuronales que se dividen rápidamente, lo que lo hace valioso para los estudios de neurogénesis.

Coloque el cerebelo en la plataforma de un cortador de tejidos.

Retire el exceso de tampón y corte el cerebelo.

Ponga un tampón de sal fría en las rodajas.

Transfiera las rodajas de cerebelo a una placa de Petri que contenga un tampón de sal fría.

Bajo un microscopio, separe las rodajas individuales para su posterior análisis.

Para comenzar, coloque los huevos de gallina marrón fertilizados en una incubadora de huevos a 38 grados centígrados hasta que alcancen el día embrionario 14. En el día embrionario 14, corte una abertura en el huevo para exponer el embrión y decapite el embrión de pollito in ovo. Coloque la cabeza en una placa de Petri que contenga PBS helado.

Bajo un microscopio de disección, use fórceps estándar para hacer una incisión detrás de cada ojo, a través del tejido y extirpar los ojos y la mandíbula superior. Luego, haga una segunda incisión a través de la faringe para extirpar la mandíbula inferior. Luego, use fórceps estándar para quitar la piel de la superficie del cráneo pelándola. Luego, retire los huesos frontal y parietal, revelando el cerebro.

Desde un aspecto ventral, retire el cartílago faríngeo y el mesénquima auxiliar. Luego, coloque el cerebro, dorsal hacia arriba y retire con cuidado el mesénquima, dorsal al rombencéfalo, teniendo cuidado de no dañar la pia. Luego, haga una incisión a través del tejido entre el mesencéfalo y el rombencéfalo para separar el rombencéfalo, incluido el cerebelo. Haga incisiones a través del tejido tanto en las uniones laterales del cerebelo como en la placa alar del rombencéfalo. Retire todo el cerebelo, teniendo cuidado de mantener la integridad de la pia durante toda la disección.

Finalmente, retire el plexo coroideo en formación y mueva el cerebelo disecado hacia HBSS helado. Transfiera todo el cerebelo a la plataforma estéril de un picador de tejidos, usando una espátula o una pipeta Pasteur de 3 mililitros con la punta cortada para ensanchar la abertura. Elimine el exceso de líquido con una pipeta.

Ajuste la velocidad de corte del picador de tejidos al 50% de su valor máximo. Luego, corte el cerebelo en la orientación requerida con un grosor de 300 micrómetros. Con una pipeta Pasteur de 3 mililitros, cubra el cerebelo en rodajas con HBSS frío.

A continuación, transfiera el HBSS y las rodajas a una placa de Petri de 60 milímetros que contenga 20 mililitros de HBSS helado, utilizando la pipeta Pasteur de 3 mililitros con la punta cortada. Coloque la placa de Petri bajo un microscopio de disección, iluminado con una fuente de luz de fibra óptica. Luego, use un fórceps de relojero para separar cortes individuales de tejido cerebral.