Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:29 min. • July 8th, 2025
Cosecha la médula espinal del ratón y córtala en fragmentos.
Transfiera los fragmentos a un tubo que contenga una enzima proteolítica y ADNasa. Vórtice e incube.
La enzima digiere la matriz extracelular del tejido, mientras que la ADNasa degrada el ADN libre contaminante.
Vuelva a agitar y pipetear repetidamente para completar la disociación del tejido, obteniendo una suspensión unicelular.
Centrifugar y eliminar el sobrenadante. Vuelva a suspender las células en una solución que contenga ADNasa, un inhibidor de la proteasa y un vórtice. El inhibidor neutraliza la enzima.
Coloque una capa de solución inhibidora nueva en la parte superior, centrifugue y retire el sobrenadante.
Vuelva a suspender las celdas en medios de gradiente de densidad, vórtice y luego centrifuge.
Las células se asientan en la parte inferior, mientras que los restos de mielina permanecen en la parte superior.
Deseche los escombros. Lave repetidamente con tampón, centrifugue y retire el sobrenadante. Vuelva a suspender las células en los medios de crecimiento.
Coloque las celdas en placas. La superficie sin recubrimiento facilita la adhesión de las células gliales.
Retire el medio gastado y agregue medios nuevos
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