Diferenciación de células progenitoras óticas en células epiteliales sensoriales seguidas de inmunotinción
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:55 min. • July 8th, 2025
Cultive células progenitoras óticas multipotentes, o iMOP, en medios.
Los factores de crecimiento en el medio facilitan la proliferación de iMOP y la formación de colonias, creando otosferas.
Recoge las otosferas y déjalas reposar por gravedad.
Elimine los medios y agregue medios de diferenciación que carezcan de factores de crecimiento. Coloque las otosferas en placas.
La ausencia de factores de crecimiento inicia la diferenciación de iMOP en células epiteliales sensoriales.
Recoge las otosferas diferenciadas y déjalas reposar.
Retire el medio y agregue un fijador para preservar la morfología celular.
A continuación, agregue un detergente para permeabilizar las membranas celulares y nucleares.
Agregue un tampón de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Introducir anticuerpos primarios dirigidos a un marcador de diferenciación específico.
Agregue anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos dirigidos a los anticuerpos primarios, faloidina marcada con fluorescencia para teñir actina y un colorante de unión al ADN para teñir los núcleos.
Monte las otosferas.
Usando microscopía de fluorescencia, visualice la tinción para confirmar la diferenciación de iMOP.
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