Diferenciación de progenitores óticos multipotentes inmortalizados en neuronas ganglionares espirales y evaluación de la diferenciación

Tome una placa de pocillos múltiples que contenga cubreobjetos estériles recubiertos con un sustrato de cultivo celular.

Introducir progenitores óticos multipotentes inmortalizados, o iMOPs, en un medio de diferenciación neuronal.

Las iMOP son precursoras de varias células del oído interno, incluidas las neuronas ganglionares espirales, o SGN, que transmiten información auditiva al cerebro.

Incubar, permitiendo que las células se adhieran al sustrato. El medio induce la diferenciación de las iMOP en SGN.

Agregue un fijador para inducir la reticulación de proteínas, preservando la morfología celular, y una solución detergente para permeabilizar las membranas celulares.

Introduzca un reactivo de bloqueo para evitar el etiquetado no específico.

Agregue anticuerpos conjugados con fluoróforos específicos para marcadores de diferenciación neuronal e incube, lo que permite que los anticuerpos marquen los SGN.

Lave para eliminar los anticuerpos no unidos y monte los cubreobjetos con un medio de montaje que contenga una tinción nuclear fluorescente.

Mediante microscopía de fluorescencia, detecte las señales de anticuerpos para confirmar la diferenciación de iMOP en SGN.

Primero, limpie los