Cultivo e imagen ex vivo de cortes oculomotores de embriones de ratón transgénicos

Tome un ratón preñado transgénico, aísle quirúrgicamente el útero que contiene embriones y lávelo para eliminar la sangre residual.

Retire los embriones que contienen neuronas motoras marcadas con fluorescencia y transfiéralos a la tapa de una placa de pocillos múltiples.

Agregue agarosa fundida y enfríe la tapa para inducir la formación de gel, incrustando los embriones.

Bajo un microscopio de fluorescencia, alinee los núcleos oculomotores y los ojos en una línea y recorte la agarosa paralela a la línea.

Fije un embrión en una etapa de muestra y colóquelo en una cámara de vibratomo llena con un tampón de corte frío.

Usando el vibratomo, genere cortes que contengan los núcleos oculomotores y los ojos. Los núcleos forman los nervios oculomotores que controlan el movimiento ocular.

Transfiera las rodajas a insertos de cultivo dentro de una placa de pocillos múltiples que contenga un medio de cultivo e incube.

Usando un microscopio de fluorescencia, obtenga imágenes a intervalos regulares para observar las neuronas oculomotoras marcadas con fluorescencia que extienden los axones para llegar a los ojos.

Antes de comenzar el procedimiento, primero, confirme el embarazo mediante ultrason