Diferenciación de células madre pluripotentes inducidas por el ser humano en células endoteliales microvasculares cerebrales

Comience con una placa de pocillos múltiples que contenga células madre pluripotentes inducidas por humanos, o iPSC, en un medio con un inhibidor de la Rho-quinasa, que promueve la supervivencia celular.

Reemplace el medio con un medio esencial que contenga nutrientes y factores de crecimiento.

Incubar para permitir la proliferación y diferenciación de iPSC en células precursoras.

Reemplace este medio con un medio de diferenciación complementado con factores de crecimiento de fibroblastos y ácido retinoico, luego incube.

Los factores de crecimiento facilitan la diferenciación de las células precursoras en células endoteliales microvasculares, mientras que el ácido retinoico promueve la síntesis de proteínas de unión estrecha.

Lave y trate las células con una solución enzimática de EDTA para separarlas, creando una suspensión unicelular.

Centrifugar para recolectar las células y eliminar el sobrenadante. Luego, vuelva a suspender las células en un medio de diferenciación fresco.

Siembre esta suspensión celular en una placa de pocillos múltiples recubierta con colágeno y proteínas de adhesión.

Incubar para permitir la adhesión celular, formando uniones estrechas entre las células, qu