Generación de cortes de corteza cingulada anterior y tálamo medial a partir de cerebros de ratón

Comience con una cabeza de ratón cortada. Retire la piel para exponer el cráneo y ábralo para acceder al cerebro.

Retire los bulbos olfatorios y corte las conexiones nerviosas para extraer el cerebro en líquido cefalorraquídeo artificial oxigenado helado o aCSF.

Tome el cerebro y haga dos cortes verticales en cada mitad para exponer la anatomía interna.

Haga dos cortes en ángulo para aislar la región que contiene el tálamo medial-corteza cingulada anterior o la vía MT-ACC. El MT, una parte del tálamo, actúa como una estación de relevo a través de proyecciones neuronales que se extienden hasta el ACC en la corteza frontal.

Fije el cerebro en una placa en ángulo con un adhesivo, haga un corte para desplegar el cerebro y exponer la vía, y luego conéctelo a una etapa de muestra de vibratomo.

Coloque la platina en el vibratomo, agregue un búfer y genere cortes que contengan la vía MT-ACC.

Mantenga los cortes de cerebro en un flujo continuo de líquido cefalorraquídeo oxigenado para mantener su viabilidad.

Exponga el cráneo del animal y recorte el músculo restante. A continuación, retire la superficie dorsal del cráneo con rongeurs y recorte los lados. Posteriormente, con una espátula, corte los bulbos olfatorios y las conexiones nerviosas a lo largo de la superficie ventral del cerebro antes de extraerlo.

Transfiera rápidamente el cerebro a un vaso de precipitados lleno de ACSF oxigenado helado. Para preparar cortes que contengan la vía MT-ACC, haga un corte sagital de 2 milímetros laterales a la línea media en cada hemisferio para mostrar la anatomía subcortical.

Luego, haga un corte transversal en ángulo paralelo al tracto de fibras visible en el cuerpo estriado. Haga el segundo corte transversal en ángulo desde la conexión entre el cerebelo y la corteza visual, hasta el punto medio entre la comisura anterior y el tracto óptico que son ventrales y paralelos a la vía cingulada del tálamo. Después de eso, coloque el bloque cerebral en una placa angular con un adhesivo de cianoacrilato.

Haga un corte justo por encima del punto de inflexión del camino. Después de eso, despliega la placa, aplástala y pégala en la etapa de la cámara de un vibrátomo. Posteriormente, secciona las rodajas cerebrales a 500 micrómetros de grosor y mantenlas en ACSF oxigenado helado. Transfiera una rebanada a la cámara de registro a 32 grados centígrados con perfusión continua de ACSF oxigenado durante una hora.