Preparación de rodajas de corteza rinal e hipocampo a partir del cerebro de un cachorro de rata

Tome un cerebro de cachorro de rata recién cosechado, con la espalda hacia arriba, en una placa de cultivo con tampón enfriado.

Abrir los hemisferios cerebrales y extraer los tejidos que cubren el hipocampo.

Incide en los hemisferios para que contengan el hipocampo y las cortezas rinales.

Coloque ambos hemisferios con el hipocampo hacia arriba y paralelo sobre un papel de filtro.

Transfiera este conjunto a un picador de tejidos con la cuchilla perpendicular a los hemisferios.

Cortar los hemisferios al grosor requerido para obtener rodajas y transferirlas a una placa de cultivo con tampón refrigerado.

Separe cuidadosamente las rodajas y disecciérelas para incluir regiones del hipocampo y la corteza rinal estructuralmente intactas.

Transfiera las rodajas a insertos membranosos en una placa de varios pocillos que contenga medios.

Retire el exceso de tampón de las rodajas e incube para la recuperación del tejido.

Actualice los medios. Las rebanadas se pueden utilizar para un análisis más detallado.

Transfiera el cerebro, con la espalda hacia arriba, a una placa de 60 milímetros que contenga 5 mililitros de GBSS frío. Inserte fórceps finos en el cerebelo e inserte la espátula a lo largo de la línea media para abrir con cuidado el hemisferio. Use fórceps cortos y curvos para eliminar con cuidado el exceso de tejido que cubre el hipocampo sin tocar la estructura del hipocampo. Luego, corte debajo de cada hipocampo.

Transfiera un hemisferio a la vez, con el hipocampo hacia arriba y paralelo entre sí, a un trozo de papel de filtro. Coloque el papel de filtro en un picador de pañuelos con los hemisferios perpendiculares a la cuchilla y corte los hemisferios en rodajas de 350 micras. Transfiera el tejido cortado a una nueva placa de Petri que contenga 5 mililitros de GBSS frío y use electrodos de punta redonda para separar cuidadosamente las rodajas.

Manteniendo solo las muestras con una corteza rinal y un hipocampo estructuralmente intactos, use una espátula y un electrodo de punta redonda para colocar hasta cuatro cortes intactos en insertos individuales en el número apropiado de pocillos de una placa de seis pocillos que contiene 1,1 mililitros de medio de cultivo por pocillo.

Utilice una pipeta P20 para eliminar cualquier exceso de medio de disección alrededor de cada rebanada. Coloque la placa en la incubadora de cultivos celulares. Cambie el medio cada dos o tres días. Use fórceps para levantar el inserto. Aspire el medio del pocillo correspondiente y vuelva a colocar el inserto en su lugar. Use una pipeta P1000 para agregar 1 mililitro de medio fresco a 37 grados Celsius a cada pocillo.