Disección y montaje de explantes de cerebro de larvas de mosca de la fruta

Comience con las larvas de Drosophila, una mosca de la fruta, en una solución salina fisiológica dentro de un plato. La solución evita que las larvas se deshidraten.

Bajo un microscopio de disección, ubique el extremo anterior de las larvas con los ganchos bucales.

El extremo anterior contiene los discos oculares y el sistema nervioso central, o SNC, que comprende los lóbulos cerebrales y un cordón nervioso ventral.

Sostenga el extremo posterior de la larva con fórceps. Con otro par de fórceps, tire del extremo anterior para extraer los órganos internos.

Extirpar el intestino y los músculos adheridos para aislar el SNC unido a los discos oculares.

Para montar el explante cerebral, transfiera el tejido extraído a la solución salina encerrada dentro de una barrera de grasa en un portaobjetos de vidrio.

Asegúrese de que el lado dorsal del explante esté hacia arriba y selle el tejido con un cubreobjetos. El explante cerebral está listo para su análisis.

Para recolectar cerebros de larvas de Drosophila, bajo un microscopio de disección, use un par de fórceps de disección de punta estándar número 5 para mantener una muestra larvaria en su lugar, mientras usa el otro para diseccionar cuidadosamente el cerebro, preservando los discos oculares, los lóbulos cerebrales y el cordón nervioso ventral. Luego, retire los músculos unidos para minimizar cualquier movimiento de la muestra durante la obtención de imágenes. Cuando se hayan extraído todos los cerebros, use grasa de vacío para dibujar una cámara cuadrada en un portaobjetos de vidrio y agregue 20 microlitros de solución salina externa a la cámara.

Use las pinzas para transferir los cerebros a la cámara y ajuste las posiciones de los cerebros bajo el microscopio, con los lados dorsales hacia arriba. Cubra la cámara con un cubreobjetos de vidrio y presione suavemente el cubreobjetos para reducir la deriva de la muestra durante el procedimiento de obtención de imágenes.