Diferenciación de células madre pluripotentes inducidas humanas en neuronas motoras funcionales
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:29 min. • July 8th, 2025
Tomemos colonias de células madre pluripotentes inducidas por humanos, o iPSC, cultivadas en una placa recubierta de matriz extracelular.
Las iPSC están modificadas genéticamente para expresar factores de transcripción que inducen la diferenciación de las neuronas motoras.
Retire el medio y agregue enzimas para separar las colonias.
Disociar mecánicamente las células en una suspensión unicelular y recolectarlas.
Centrifugar y eliminar el sobrenadante.
Vuelva a suspender las células en un medio que contenga un inhibidor que prevenga la apoptosis celular.
Coloque las celdas en un plato recubierto de matriz.
Agregue nuevos medios de diferenciación que contengan el antibiótico doxiciclina e inhibidores de moléculas pequeñas.
La doxiciclina induce la expresión del factor de transcripción, mientras que los inhibidores bloquean vías de señalización específicas, promoviendo la diferenciación de iPSC en progenitores de neuronas motoras.
Agregue enzimas para separar las células.
Recoge las células y disociarlas mecánicamente.
Centrifugar y desechar el sobrenadante. Resuspender las células en medios neuronales.
Coloque las células en microportaobjetos recubiertos de proteínas de adhesión para
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