Generación de un modelo de cocultivo 3D de fibroblastos y neuronas corneales humanas

Tomemos como ejemplo los fibroblastos corneales humanos.

Transfiéralos a un inserto de membrana dentro de una placa de pocillos múltiples que contenga medios.

Agregue medios al inserto de membrana. Incubar para la adherencia de fibroblastos al inserto.

A continuación, reemplace el medio con un medio que contenga vitamina C en el inserto de membrana y el depósito.

incubar. La vitamina C estimula a los fibroblastos para que secreten y ensamblen una matriz extracelular 3D.

Agregue una suspensión celular de neuroblastoma humano sobre los fibroblastos.

Incubar, permitiendo la adhesión celular del neuroblastoma.

Ahora, agregue medios que contengan ácido retinoico sobre las células y complemente el depósito con medios nuevos.

incubar. El ácido retinoico desencadena la diferenciación celular del neuroblastoma en células progenitoras neurales.

A continuación, retire el medio. Introduzca medios nuevos en el depósito. Agregue medios que contengan un factor neurotrófico al inserto de membrana e incube.

Los factores neurotróficos desencadenan la diferenciación de las células progenitoras en neuronas, generando un modelo de cocultivo 3D de fibroblastos y neuronas corneales humanas.

Para ensambla