Inmunotinción tisular para la citometría de masas por imágenes

Coloque un portaobjetos de vidrio con una muestra de tejido fija en un tampón de recuperación de antígenos y caliéntelo.

La temperatura elevada y el pH alcalino del tampón rompen los enlaces cruzados de proteínas inducidos por la fijación, exponiendo los epítopos de antígenos.

Enfríe el portaobjetos para evitar daños tisulares inducidos por el calor, luego enjuague para eliminar el exceso de tampón.

Aplique una barrera hidrofóbica y coloque el portaobjetos en una cámara de humedad.

Agregue un tampón que bloquee la permeabilización. El detergente del tampón permeabiliza las membranas celulares y las proteínas bloqueadoras enmascaran los sitios de unión no específicos para reducir las manchas de fondo.

Elimine el exceso de tampón, agregue un cóctel de anticuerpos conjugados con metal e incube para permitir la unión de anticuerpos a antígenos específicos.

Lave el portaobjetos, eliminando los anticuerpos no unidos.

Agregue una tinción nuclear conjugada con metal que ingrese a las células y se una al ADN.

Enjuague el exceso de mancha y seque el portaobjetos.

Usando un escáner óptico, obtenga imágenes de alta resolución de las características estructurales del tejido, lo que ayuda a inte