Establecimiento de una configuración de celda completa a través del método de fijación de parches

0 vistas3:12 min • July 8th, 2025

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Comience con un corte de cerebro de ratón inmovilizado colocado en una cámara de registro de la configuración de electrofisiología llena de un líquido cefalorraquídeo artificial para mantener la viabilidad neuronal.

La configuración contiene una micropipeta de grabación llena de solución catiónica premontada conectada a un amplificador y una unidad de control de presión.

Bajo un microscopio, localiza una neurona y coloca la micropipeta cerca de ella.

Aplique presión de aire positiva para limpiar cualquier residuo.

Mueva la micropipeta hacia la neurona hasta que se forme un hoyuelo en la membrana, lo que indica proximidad neuronal.

Aplique una succión débil para tirar de un pequeño parche de membrana dentro de la micropipeta.

Esto crea un sello hermético que aumenta la resistencia de la micropipeta, confirmando un sello estable.

Mantener el potencial de la célula en un potencial de reposo fisiológico para la estabilidad celular.

Luego, aplique una succión breve y fuerte para interrumpir la membrana del parche, estableciendo una conexión directa con el interior de la célula.

Esta configuración de células completas está lista para registrar la actividad eléctrica neuronal.

Con la rueda de enfoque fino del microscopio, comience a enfocar hacia abajo mientras baja la micropipeta gradualmente. Siempre enfoque hacia abajo primero, y luego, baje la micropipeta al plano de enfoque para asegurarse de que la punta de la micropipeta no penetre bruscamente en la rebanada. Cuando la micropipeta entre en contacto con la superficie de la loncha, reduzca la velocidad del micromanipulador al modo medio-bajo. Aplique suavemente una ligera presión positiva para eliminar cualquier residuo en el camino.

Luego, acérquese a la celda, ya sea alternando con las perillas de control X, Y, Z, o acercándose en diagonal donde ambos ejes XZ cambian con la rotación de la perilla del eje Z. Cuando la micropipeta esté lo suficientemente cerca de la célula, aparecerá un hoyuelo en la superficie celular.

Ahora, aplique una succión débil y breve a través del tubo que está conectado al tubo de succión del soporte de la pipeta para crear un sello. Mientras se forma un gigaseal, use el controlador del amplificador controlado por computadora para llevar el potencial de retención de las células al potencial de reposo fisiológico para evitar cambios repentinos una vez que se rompe la membrana. Después de que se haya formado el gigasello, compense la capacitancia rápida o lenta.

Aquí es muy importante que la succión aplicada no sea demasiado fuerte, de lo contrario la membrana puede romperse antes de establecer el sello.

Si el sello permanece estable y por encima de 1 giga ohmio, aplique una succión breve y fuerte para romper la membrana plasmática.

La succión debe ser breve y más fuerte que la presión aplicada al establecer un sello para romper correctamente la membrana y lograr una configuración estable de toda la celda.

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Última actualización: 1 agosto 2026