Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:06 min. • July 8th, 2025
Comience con una configuración de electrofisiología con un corte de cerebro inmovilizado sumergido en un líquido cefalorraquídeo artificial o aCSF que contiene diferentes iones.
La configuración incluye una pipeta de parche llena de una solución rica en potasio conectada a un electrodo de grabación y un amplificador.
Aplique presión de aire positiva a la pipeta para evitar que se obstruya. Luego, colóquelo cerca de una dendrita, la extensión receptora de señales de una neurona dopaminérgica.
Los hoyuelos de membrana resultantes confirman la proximidad a la dendrita.
Libere la presión positiva para crear succión, formando un sello hermético entre la pipeta y la membrana dendrítica.
Registre el movimiento inicial de iones como una corriente de acción al voltaje de referencia.
ACSF de flujo con bloqueadores de canales de sodio y calcio para bloquear los canales respectivos, evitando el movimiento de iones a través de ellos.
Aplique un voltaje negativo para abrir un canal catiónico dependiente de voltaje.
Este canal permite que los iones de potasio entren en la neurona, aumentando la corriente de acción y sugiriendo la estimulación de la dendrita en una neurona dopaminérgica.
En este procedimiento, transfiera un corte de cerebro a la cámara de grabación. Ancle la rebanada en la parte inferior de la cámara de grabación con un anillo de platino y asegúrese de que la rebanada sea de buena calidad con una superficie lisa y uniforme. Luego, seleccione una neurona con una dendrita que se extienda a una larga distancia en el mismo plano y asegúrese de que la dendrita de interés se pueda seguir hasta un soma bien definido. A continuación, llene la pipeta de parche con solución de electrodos.
Para parchear la dendrita en modo de adherencia celular, identifique y concéntrese en una parte de la dendrita. Aplique presión positiva a la pipeta y bájela con el micromanipulador. Luego, coloque la pipeta cerca de la membrana y ajuste la presión para crear un pequeño hoyuelo. Posteriormente, libere la presión sobre la punta de la pipeta y parche la dendrita mientras controla la resistencia de la pipeta. Intente obtener una resistencia de sellado superior a 1 giga ohmio, en el mejor de los casos entre 3 y 10 giga ohmios para grabaciones conectadas a celdas.
Después, retraiga la pipeta de la membrana un par de micrómetros para evitar la deformación de la dendrita. Las corrientes de acción que se ven aquí representan los potenciales de acción espontánea de las neuronas negras. Para suprimir las corrientes de acción, aplique bloqueadores de canales de calcio y sodio a ACSF. Luego, aplique un paso de voltaje de menos 90 milivoltios desde un potencial de retención de 0 milivoltios para evocar la corriente catiónica activada por hiperpolarización.