Análisis de la actividad neuronal en neuronas primarias de ganglios espirales murinos mediante matrices de electrodos múltiples

Comience con un cultivo de neuronas ganglionares en espiral en una matriz de electrodos múltiples, o MEA.

El MEA consiste en electrodos de registro conectados a contactos a través de un circuito.

Lave el MEA para eliminar los medios y seque los contactos para evitar el ruido inducido por la humedad durante la grabación.

Monte el MEA en su soporte e instálelo en la configuración de grabación.

Los contactos MEA se alinean con los conectores del soporte que transmiten señales eléctricas a la configuración de grabación.

Agregue una solución que imite el entorno extracelular, lo que permite una actividad fisiológica normal en las neuronas.

Comience a grabar. Los electrodos detectan señales espontáneas o potenciales de acción generados por las neuronas, visualizados como picos en la interfaz del software.

Ahora, aplique un pulso eléctrico a un electrodo que muestre actividad espontánea.

El pulso genera un campo eléctrico, estimulando las neuronas en los electrodos vecinos.

Registre la actividad dependiente de la estimulación.

Finalmente, agregue una neurotoxina que bloquee los canales iónicos dependientes de voltaje, evitando la generación de potencial de acción.

Grabe la señal para identificar el ruido de fondo.

Después de un cultivo colectivo de 18 días, lave el cultivo MEA con la solución extracelular preparada anteriormente a temperatura ambiente. Luego, seque los contactos del chip MEA con un trozo de pañuelo y monte los MEA en el soporte MEA. Finalmente, instale el MEA en la configuración de grabación.

Luego, agregue 300 microlitros de la solución extracelular y espere 10 minutos para permitir que el sistema se estabilice antes de grabar. Ahora, registre la actividad espontánea durante dos minutos de todos los electrodos e identifique los electrodos activos. Luego, identifique los electrodos que responden a la estimulación.

Para excluir el artefacto de estimulación, estimule desde el mismo electrodo 10 veces. Si el cultivo responde al menos ocho de cada 10 veces, se puede suponer que es una respuesta positiva tras la estimulación inducida por electrodos. Para identificar el ruido de fondo, aplique TTX al cultivo a una concentración de un micromolar para bloquear los canales de sodio dependientes de voltaje y luego grabe durante dos minutos.