Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:44 min. • July 8th, 2025
Tome una pipeta de estimulación que contenga fluoróforos rojos insensibles al calcio en líquido cefalorraquídeo artificial, o ACSF.
Coloque la pipeta cerca de la neurona diana en un corte de hipocampo.
Coloque una pipeta de parche con un electrodo de registro bañado en un electrolito que contenga fluoróforos indicadores de calcio rojo insensibles al calcio y verdes cerca del objetivo.
Aplique presión positiva constante para perturbar brevemente la superficie del tejido, indicando la proximidad al objetivo.
A medida que se forma el hoyuelo en la membrana neuronal, libere la presión para formar un sello.
Aplique presión negativa para apretar el sello.
Estabilizar el potencial de membrana a un voltaje negativo constante.
Continúe con presión negativa para romper la membrana, permitiendo que los electrolitos que contienen fluoróforo se propaguen dentro de la neurona.
Visualice la fluorescencia roja de la columna dendrítica objetivo y alinee la pipeta de estimulación cerca de ella.
Aplique pulsos eléctricos para abrir los canales de calcio.
Utilice microscopía de dos fotones para visualizar los cambios transitorios en los niveles de calcio según lo indicado por la fluorescencia verde.
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