Microinyección de fármacos con registro electrofisiológico en el cerebro de una rata

Comience con un inyectrode, un sistema de inyección que contiene electrodos. Cuenta con una microaguja y un electrodo de alambre de plata insertados dentro de una micropipeta de vidrio.

Llene el inyector con una solución de fármaco de prueba que contenga un tinte para facilitar el seguimiento de la propagación del fármaco dentro del cerebro.

Coloque una jeringa llena de aceite mineral en el inyectrode. Limpie cualquier exceso de líquido.

Asegure este inyector en una unidad estereotáxica y conéctelo a un sistema de microbomba.

Coloque el inyectrode en la región cerebral objetivo de una rata anestesiada con un orificio quirúrgico en el cráneo.

Baje gradualmente el inyectrode para penetrar en la región objetivo.

Detenga la inserción al recibir señales eléctricas específicas que confirmen la colocación óptima del inyector.

Cubra el cráneo expuesto con agar tibio para evitar que el tejido se seque.

Permita que el tejido cerebral se estabilice.

Inyecte la dosis deseada del medicamento.

Registre señales eléctricas para monitorear la actividad neuronal en respuesta al fármaco administrado.

Prepare el inyector llenando primero una jeringa de 5 a 10 microlitros con aceite mineral. A continuación, prepare el medicamento de interés con un tinte en solución salina fisiológica. Aquí, el 0,5% de Chicago Sky blue se mezcla con 300 GABA micromolares. Ahora, llene la pipeta de inyección cargando primero una jeringa de 1 mililitro con la solución preparada y luego usando la jeringa para cargar la pipeta.

Al retirar la jeringa, mantenga una ligera presión sobre el émbolo para que el vacío no elimine la solución del inyector. Verifique si hay fugas de líquido en posibles puntos de fuga. Limpie el exceso de líquido y vuelva a verificar si hay fugas. Ahora conecte la microjeringa con aceite mineral al inyector. Luego, limpie cualquier exceso de solución con una gasa.

Revise la punta de inyección. Debería ser posible hacer fluir pequeñas gotas de solución a través de él. De lo contrario, está bloqueado o tiene fugas. Ahora, monte de forma segura el inyectrode en un sistema de microbomba. Luego, mueva la posición del inyectrode a las coordenadas objetivo y baje el electrodo al colículo superior, que se puede identificar mediante el registro de potenciales evocados visuales.

Mientras se baja el electrodo, aplique una pequeña presión positiva aplicando una tasa baja de inyección para evitar obstrucciones. Interrumpa la inyección cuando se alcance la estructura. Después de insertar el inyectrode, cubra la corteza expuesta con agar tibio para evitar la desecación. Después de la colocación final del electrodo, espere 30 minutos para permitir la estabilización del tejido que rodea el electrodo. Luego, inyecte de 400 a 800 nanolitros de solución a una velocidad de 40 nanolitros por minuto hasta la inactivación de la actividad neuronal en el colículo superior.

El electrodo debe mostrar una reducción de los picos durante la inyección de la solución inhibitoria.