Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:10 min. • July 8th, 2025
Comience con una cámara de registro de comportamiento que contenga una larva de pez cebra transgénica anestesiada inmovilizada en una agarosa de bajo derretimiento.
La región del pretectum del mesencéfalo de la larva y el lóbulo inferior del hipotálamo contienen neuronas modificadas que expresan indicadores fluorescentes de calcio.
Retire la agarosa alrededor de la cabeza de la larva y lávela con agua para eliminar cualquier agarosa residual.
Coloque un paramecio como presa cerca de la larva.
Transfiera la cámara de grabación a un microscopio de fluorescencia.
A medida que la presa nada, el ojo de la larva la detecta y envía una señal a las regiones del pretectum y el hipotálamo involucradas en la detección de presas.
Esto abre los canales de calcio en estas neuronas, lo que permite que los iones de calcio entren y se unan a los indicadores de calcio, lo que lleva a la emisión de fluorescencia.
Registre las imágenes de lapso de tiempo para detectar la intensidad de fluorescencia de las neuronas a lo largo de la trayectoria de natación de la presa y genere un mapa de colores.
En este mapa, las puntas de flecha representan las trayectorias de las presas: las flechas negras no muestran excitación neuronal, mientras que las flechas de colores indican una mayor excitación neuronal provocada por el movimiento de la presa.
Después de cultivar paramecios y anestesiar una larva de pez cebra de acuerdo con el protocolo de texto, coloque la larva en agarosa de bajo punto de fusión al 2% y elimine inmediatamente cualquier exceso de agarosa para que la superficie de la agarosa se vea ligeramente convexa. Con una aguja de disección, oriente rápidamente la larva en posición vertical.
Luego, con un cuchillo quirúrgico, haga algunos cortes pequeños en la agarosa para eliminar la agarosa alrededor de la cabeza del pez cebra, lo que deja espacio para que nade el paramecio. Retire con cuidado la agarosa residual vertiendo suavemente agua del sistema en la cámara. A continuación, coloque un paramecio en la cámara de grabación para que sirva como estímulo visual.
Luego, coloque la cámara de grabación debajo de un microscopio de epifluorescencia equipado con una cámara CMOS científica y seleccione una lente de objetivo de 2.5x. Inicie la aplicación de adquisición de imágenes para la cámara equipada. Haga clic en Panel de secuencia y seleccione Registro de disco duro en el panel. En la sección Configuración de escaneo, establezca el número de fotogramas en 900 o cualquier otro número total de fotogramas que desee.
En el panel Captura, establezca el Tiempo de exposición en 30 milisegundos y la Agrupación en bins en 2 por 2. Haga clic en Live en el panel de captura para localizar la larva en la vista y el enfoque de la cámara y, a continuación, haga clic en Stop Live y haga clic en el botón Iniciar. Guarde la película en formato .cxd y analice los datos de acuerdo con el protocolo de texto.