Estudio de la excitabilidad de las neuronas fluorescentes utilizando una pinza de parche de célula completa
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:06 min. • July 8th, 2025
Tome un corte coronal de ratón transfectado inmovilizado en una cámara de registro perfundida con aCSF.
El corte contiene una población de neuronas piramidales dispersas que expresan una enzima diana y una proteína fluorescente.
Ensamble una pipeta de registro que comprenda una solución intracelular y un electrodo conectado a un amplificador para medir señales neuronales.
Identifique microscópicamente el área de tejido objetivo y localice una neurona fluorescente.
Aplique presión positiva a la pipeta para evitar obstrucciones y avanzar hacia la neurona objetivo.
La presión positiva provoca una ligera hendidura en la membrana neuronal al contacto.
Libere la presión, formando un sello hermético entre la membrana y la punta.
Establezca el potencial de retención en un valor negativo constante para estabilizar la neurona.
Aplique una breve presión negativa para romper la membrana, conectando el citoplasma al interior de la pipeta y estableciendo una configuración de células completas.
Cambie al modo de pinza de corriente y aplique pulsos de corriente positivos, generando potenciales de acción indicativos de excitabilidad neuronal.
Transfiera una rebanada a la cámara de registro con una
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