JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 4:01 min • July 8th, 2025
Asegure un lechón neonatal anestesiado a un marco estereotáxico.
Haga una incisión en la línea media para revelar el cráneo.
Extirpar una parte del cráneo y luego extraer la duramadre para acceder al cerebro.
Fije una matriz de microelectrodos o MEA al marco estereotáxico.
El MEA consta de un eje rígido y sitios de registro, incluidos sitios sensibles al glutamato recubiertos con glutamato oxidasa y sitios centinela recubiertos con una matriz de proteína inactiva.
Coloque el MEA verticalmente sobre el sitio quirúrgico y coloque un electrodo de pseudo-referencia debajo del cuero cabelludo para una referencia de voltaje de referencia estable.
Inserte el MEA en la región cerebral de interés e inicie la medición.
La glutamato oxidasa en los sitios de registro convierte el glutamato cerebral extracelular en peróxido de hidrógeno, que sufre oxidación electroquímica en la superficie del electrodo, generando corriente.
Los sitios centinela miden el ruido de fondo.
Normalice las señales del sitio sensible al glutamato a las señales del sitio centinela para medir los niveles de glutamato cerebral bajo anestesia.
Para comenzar, cree una incisión en la línea media de 4 a 6 centímetros a lo largo del cráneo con precaución para evitar marcar el cráneo con el bisturí. Una vez realizada la incisión, use una retracción suave y una disección contundente para elevar el cuero cabelludo del cráneo.
Luego, frote suavemente el cráneo con una gasa para eliminar cualquier tejido conectivo y exponer las líneas de sutura. Luego, determine la ubicación prevista para la craneotomía. Si el área de interés permanece oscurecida, refleje aún más el cuero cabelludo.
Ahora, use un taladro quirúrgico para crear una ventana de craneotomía de aproximadamente 0,25 centímetros cuadrados que se superponga a la estructura de interés. Tenga cuidado de no lesionar la duramadre o el cerebro subyacente. Según sea necesario, use herramientas quirúrgicas finas para extirpar la duramadre que recubre el tejido cerebral. Tenga mucho cuidado para evitar dañar el cerebro.
Este experimento utiliza una matriz de microelectrodos basada en enzimas descrita previamente con glutamato oxidasa y galvanizada con MPD. Las matrices de microelectrodos tienen un eje rígido de 40 milímetros personalizado para su uso con lechones. Asegure el brazo metálico al micromanipulador y luego coloque la matriz de microelectrodos lo más verticalmente posible sobre bregma.
Luego, baje con cuidado la matriz lo más bajo posible sin tocar la superficie del cráneo, anotando las coordenadas del bregma. Ahora, use un atlas de cerebro de lechón para determinar las coordenadas estereotáxicas exactas de la estructura de interés. Luego, vuelva a colocar el microelectrodo en consecuencia.
A continuación, coloque el electrodo de pseudo-referencia debajo del cuero cabelludo, asegurando el contacto con el animal. Ahora, baje lentamente la matriz de microelectrodos en el cerebro a casi la profundidad adecuada. Para los últimos 2 milímetros de recorrido, use un microaccionamiento hidráulico para bajar suavemente la matriz a la estructura de interés con un trauma tisular mínimo.
Después de colocar la matriz de microelectrodos, espere 30 minutos para permitir que los electrodos alcancen la línea de base. Luego, tome medidas durante aproximadamente tres horas. Si el lechón va a sobrevivir al experimento, cierre la incisión después de recopilar datos.