Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:25 min. • July 8th, 2025
Tome una cámara de grabación que contenga la matriz de microelectrodos penetrantes o PMEA, que registra señales eléctricas del tejido neural.
Conecte la entrada a botellas que contienen aCSF oxigenado y aCSF oxigenado con 4-aminopiridina o 4-AP mediante un conector trivalvo.
Conecte la salida a un tubo de vacío.
Caliente la tubería entre la entrada y el trivalvo a temperatura fisiológica.
Con la entrada y la salida cerradas, transfiera el hipocampo desplegado a la cámara.
Bajo un microscopio, coloque el hipocampo en la PMEA.
Retire la solución de la cámara.
Coloque un anclaje de tejido para sujetar el tejido en los electrodos PMEA.
Abra la entrada y la salida para iniciar el flujo de aCSF.
Incubar el tejido con aCSF para permitir la aclimatación neuronal.
Luego, fluya en aCSF con 4-AP. El 4-AP bloquea los canales neuronales de potasio, extendiendo la duración del potencial de acción.
El PMEA captura las señales eléctricas proporcionales a la activación neuronal mejorada de las neuronas del hipocampo.
En este procedimiento, llene un frasco con aCSF normal y otro frasco con aCSF 4-AP. Burbujee las soluciones con 95% de oxígeno, 5% de dióxido de carbono desde el comienzo de los experimentos. Use un conector trivalvo para controlar qué solución se seleccionará durante un experimento.
A continuación, conecte un tubo de vacío a la salida de la cámara para eliminar la solución en un contenedor de polvo. Caliente la tubería antes de entregar la solución a la cámara de registro y manténgala a una temperatura controlada de 35 grados centígrados. Después de cerrar la entrada y salida de la cámara de grabación, utilice un gotero de pipeta de vidrio hecho a medida para transferir el hipocampo desplegado a la cámara de grabación.
Bajo el microscopio, coloque el hipocampo desplegado con su lado obvio hacia abajo, el área CA3 apuntando hacia afuera y el campo CA1 apuntando hacia el investigador. Aspirar con cuidado la solución de la cámara con una pipeta de vacío desde el borde de la cámara de registro hasta que la cámara se seque y el tejido quede sobre la matriz.
Luego, coloque con cuidado un anclaje de tejido hecho a medida en la parte superior del tejido para sostener el hipocampo desplegado en la matriz. Vuelva a llenar la cámara de grabación con unas gotas de solución. Abra gradualmente la entrada y la salida para ajustar el caudal a aproximadamente dos gotas por segundo en la cámara de goteo intravenoso.
Incube el tejido en la cámara de registro con aCSF normal durante aproximadamente un minuto. Luego, cambie el suministro de solución a aCSF disuelto 4-AP y ajuste el caudal correctamente. Incube el tejido en aCSF disuelto 4-AP durante aproximadamente 5 a 10 minutos antes de registrar.