Un enfoque no invasivo para estudiar la electrofisiología de las neuronas motoras en embriones de pez cebra
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:10 min. • July 8th, 2025
Coloque embriones de pez cebra genéticamente modificados bajo un microscopio estereoscópico y observe el enrollamiento espontáneo de la cola desencadenado por las neuronas motoras de la médula espinal.
Las propiedades intrínsecas de estas neuronas provocan la afluencia de iones a través de los canales de sodio, lo que conduce a la despolarización espontánea de la membrana y a la generación de potenciales de acción que se propagan a los músculos, desencadenando el enrollamiento de la cola. Mida la frecuencia de enrollamiento.
Transfiera algunos embriones a un bloqueador de los canales de sodio para inhibir la afluencia de sodio y evaluar la frecuencia reducida de enrollamiento.
Monte los embriones no tratados en agarosa fundida; deje que la agarosa se solidifique para restringir el movimiento y observe bajo un microscopio de fluorescencia.
Las neuronas motoras expresan un biosensor con un dominio de detección de voltaje unido a la membrana, o VSD, fusionado con fluoróforos donantes y aceptores.
La despolarización cambia la conformación del VSD, acercando los fluoróforos.
Tras la excitación, el donante transfiere energía al aceptor, provocando la emisión de fluorescencia del aceptor.
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