Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:00 min. • July 8th, 2025
Monte una mosca Drosophila en un soporte con la cabeza expuesta.
Cree una abertura en un ojo y retire la córnea para exponer la retina.
Coloque el soporte en la plataforma de grabación.
Inserte un electrodo de referencia romo que contenga una solución salina fisiológica en la cápsula de la cabeza.
A continuación, inserte un electrodo de registro afilado que contenga una solución que imita el entorno intracelular a través de la abertura en la retina.
Deja que el ojo se adapte a la oscuridad.
Mida la resistencia del electrodo de registro para garantizar su idoneidad para el registro.
Luego, elimine la diferencia de voltaje de referencia entre los electrodos de registro y de referencia.
Durante la adaptación a la oscuridad, los canales iónicos específicos en las células fotorreceptoras de la retina permanecen abiertos, lo que permite una afluencia constante de iones positivos.
Estimula el ojo con destellos de luz.
En respuesta, los canales iónicos se cierran, reduciendo la afluencia de iones positivos y promoviendo el flujo.
En consecuencia, el potencial de membrana de los fotorreceptores se vuelve más negativo, medido por el electrodo de registro como una caída en el voltaje.
Cuando opere el amplificador de microelectrodos, siempre esté conectado a tierra tocando la superficie metálica de la jaula de Faraday o la mesa antivibración para evitar cargas estáticas. Asegure la mosca montada al poste de la plataforma de preparación de moscas.
Gire el soporte de la mosca para que el ojo izquierdo de la mosca esté directamente frente al investigador. A continuación, use un micromanipulador pequeño y grueso para insertar el electrodo de referencia romo suavemente a través de los ocelos de la mosca en la cápsula de la cabeza. Asegúrese de que la mosca aún parezca saludable y mueva sus antenas. La preparación debe ser excelente para merecer la grabación.
Ahora, introduzca el microelectrodo de grabación afilado en el ojo izquierdo a través de la abertura recubierta de gelatina. A medida que ingresa al tejido, la ubicación de la punta del electrodo debe ser evidente por su patrón de reflectancia. La frágil punta del electrodo debe guiarse perfectamente o se romperá, lo cual es muy difícil.
Dependiendo del tipo de célula desde la que se registre, la cabeza de la mosca debe orientarse de manera ligeramente diferente. Con los electrodos en su lugar, encienda el amplificador de microelectrodos. Luego apague la fuente de luz fría, desconéctela de la red eléctrica y conéctela a tierra central para minimizar el ruido eléctrico inducido por el bucle de tierra.
A continuación, ajuste las guías de luz de cuello de cisne para que el sistema de brazo cardán se pueda mover libremente alrededor de la mosca. Luego, apague las luces de la habitación para poner la preparación de la mosca en relativa oscuridad. Ahora, mida la resistencia del electrodo de registro en el ojo. Debe estar entre 100 y 250 megaohmios.
A continuación, configure el amplificador en pinza amperimétrica o puente y ponga a cero el voltaje entre los electrodos. Después de que la mosca se haya adaptado a la oscuridad durante unos minutos, introduzca la punta del electrodo de registro en el ojo en pasos de 0,1 a 1 micra con un paso paso piezoeléctrico o con una rotación suave de la perilla de resolución fina.
En cada paso, estimule el ojo con un destello de luz de 1 a 10 milisegundos. Cada destello de luz provocará una breve caída en el voltaje o el ERG.