Análisis de la liberación y eliminación de glutamato en una sinapsis de una sola neurona en un corte de cerebro de ratón

Comience con una configuración de electrofisiología que contenga un corte de prosencéfalo de ratón sumergido en un aCSF oxigenado.

aCSF contiene un bloqueador de los canales iónicos que inhibe selectivamente los canales de iones de sodio, evitando la excitación neuronal inducida por el sodio.

Las neuronas corticales expresan proteínas sensoras fluorescentes de detección de glutamato.

Localice una sola neurona presináptica capaz de liberar glutamato, un neurotransmisor excitador, en la sinapsis, una unión donde se conecta con las neuronas postsinápticas.

Coloque un electrodo de estimulación cerca de este botón y aplique corrientes despolarizantes.

Esto excita la neurona presináptica, provocando una afluencia de iones de calcio y facilitando la liberación de glutamato.

Inicie el registro de la intensidad de fluorescencia alrededor del bouton seleccionado.

El glutamato liberado interactúa con las proteínas sensoras y los receptores de las neuronas postsinápticas.

Mientras tanto, ilumine el área seleccionada con luz láser, lo que hace que las proteínas sensoras unidas al glutamato emitan fluorescencia; una intensidad de fluorescencia creciente indica la liberación de glutamato.

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