Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:42 min. • July 8th, 2025
Comience con una rata anestesiada asegurada en un marco estereotáctico con el cráneo expuesto.
Utilice puntos de referencia en el cráneo para calibrar y marcar las coordenadas deseadas.
Taladre agujeros en las ubicaciones marcadas.
Retire los desechos y corte la capa externa del cerebro.
Enjuague con frecuencia los orificios con solución salina para evitar que se sequen.
Taladre orificios adicionales y tornillos de anclaje para sostener los electrodos.
Instale los electrodos de referencia y los electrodos de registro electrofisiológico. Asegúrelos aplicando resina acrílica.
Coloque los electrodos de microcables de tungsteno en un marco de acuerdo con las ubicaciones de múltiples objetivos en el cerebro.
Múltiples electrodos permiten el registro simultáneo de actividades cerebrales de múltiples sitios objetivo.
Usando el punto de referencia en el cráneo, coloque los electrodos de microcables de tungsteno.
Insértelos suavemente en el cerebro.
Configure el software de grabación para detectar la actividad cerebral.
Baje los electrodos a la profundidad deseada y comience el registro de datos.
Bajo el microscopio, use una herramienta estándar de alineación de ratas estereotáxicas para calibrar la punta designada para el bregma y ajustar la barra incisiva hasta que los puntos designados para el bregma y lambda en la herramienta toquen el cráneo al mismo tiempo. Usando un soporte estereotáxico con cánula, calibrarlo al bregma y luego calcular la posición de todos los orificios de perforación en el cráneo.
Luego, marque las posiciones de los orificios que se perforarán, ya sea rascando cuidadosamente el cráneo o usando un marcador de color quirúrgico. Luego, con un microtaladro, taladre con cuidado todos los orificios con un diámetro de aproximadamente 1 milímetro. Para el STN y el SNr, taladre un orificio común de aproximadamente 2 milímetros por 3 milímetros.
Tome una cánula fina y doble la punta para formar dos ganchos. Luego, use los ganchos para eliminar cualquier residuo de los orificios de perforación y corte y retire con cuidado la duramadre en el orificio común STN / SNr. Después de eso, enjuague los orificios de perforación con solución salina fisiológica.
Aplique una gota de solución salina fisiológica cada 15 minutos en los orificios de perforación para evitar que el cerebro y la duramadre se sequen. Luego tome un microtaladro y un microtornillo de acero inoxidable a juego. Taladre un orificio y atornille un microtornillo entre los orificios de perforación de los electrodos epidurales de referencia sobre el cerebelo.
A continuación, guíe las puntas de los electrodos con pinzas finas y deslícelas directamente debajo del hueso del cráneo en los orificios de perforación. Fije todos los electrodos epidurales con acrílico dental de dos componentes. Asegúrese de no cubrir el punto de bregma ni afectar el orificio común STN / SNr.
Luego, inserte el soporte preparado con los electrodos de microcables de tungsteno en el marco estereotáxico. Calibre el electrodo más ventral al bregma, que está destinado a apuntar al STN. Ajuste a la posición calculada sobre el orificio STN / SNr común y baje los electrodos hasta el cerebro.
Asegúrese de que los electrodos de microcables de tungsteno entren en el cerebro sin problemas. En este procedimiento, configure el software de grabación, como el filtro de paso de banda, y amplifique la señal de datos sin procesar. Luego, use un LFP en línea y un filtro de picos con la configuración adecuada.
Para todos los filtros, use un filtro de tipo Butterworth. Configure un umbral de picos para la clasificación de picos en línea. La mayoría de los programas de grabación permiten establecer un umbral de pico, que es un valor de amplitud por encima del umbral en el que el software marca una señal como pico. A continuación, baje lentamente los electrodos de microcables de tungsteno a 1 milímetro por encima del STN y espere a que la señal se estabilice si es necesario.