Registro de neuronas sensoriales olfativas en ratones

Tomemos la cabeza cortada de un ratón modificado genéticamente. El epitelio olfativo de su nariz contiene neuronas sensoriales olfativas, u OSN, con receptores de olor marcados con fluoróforos.

Retire la piel y diseccione la cabeza para aislar el tabique con epitelio olfativo adherido.

Separe y asegure el epitelio en una cámara de registro.

Usando un microscopio de fluorescencia, detecte los receptores marcados para apuntar a la perilla dendrítica de los OSN.

Lleve una pipeta de registro con una solución intracelular que contenga nistatina, un antibiótico que perfora la membrana.

Aplique presión positiva para evitar la obstrucción de la pipeta. Inserte la pipeta en el epitelio y acérquese a un OSN.

Cambie a presión negativa, formando un sello con la membrana celular. Aplique corriente para mantener la membrana en el potencial de reposo.

La nistatina perfora la membrana, lo que permite la medición de corrientes iónicas intracelulares.

Coloque una pipeta que contenga un estimulante de olores cerca del OSN. Libera el estimulante, que se une a los receptores de olores, activando la apertura del canal iónico para permitir la afluencia de iones. Registre las señales electrofisiológicas r