Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:27 min. • July 8th, 2025
Comience con un ratón que se mueve libremente con una cánula de fibra óptica implantada.
Conecte un extremo de un cable de conexión de fibra óptica a la cánula y el otro extremo a una fuente de luz de excitación.
El ratón expresa un indicador de calcio codificado genéticamente marcado con fluoróforo verde, o GECI, en el área hipotalámica lateral, o neuronas LHA.
La fibra óptica implantada entra en contacto con la región de la habénula lateral, o LHb, donde terminan los axones LHA.
Excite el GECI en su longitud de onda de excitación óptima y registre la señal de referencia.
Ahora, aplique repetidas bocanadas de aire al mouse para evocar una respuesta de estrés aversivo.
Este estímulo desencadena potenciales de acción en los terminales del axón LHA, abriendo canales de calcio dependientes de voltaje y permitiendo la entrada de calcio.
Los iones de calcio intracelulares se unen al GECI, induciendo un cambio conformacional que aumenta la emisión de fluorescencia verde.
Visualice la señal óptica.
El aumento de la fluorescencia en respuesta a las bocanadas de aire en el ratón confirma el papel de la vía LHA-LHb en la transmisión de señales aversivas.
Comience inspeccionando el extremo distal de las fibras del cable de conexión a simple vista y con un mini microscopio de fibra. Si la superficie de las fibras está rayada, vuelva a pulir las fibras con una película de pulido de fibra con grano fino. Luego, limpie los extremos distales del cable de conexión con etanol al 70% y un aplicador de punta de algodón. Limpie las cánulas de fibra óptica con etanol al 70% y un aplicador de punta de algodón.
Conecte el extremo de la férula del cable de conexión a la fibra implantada con un manguito dividido de cerámica cubierto con un tubo retráctil negro. Durante la conexión, asegúrese de que el manguito esté apretado. Deje que el animal se recupere durante unos minutos, luego, comience a registrar la señal óptica y ejecute el experimento. Mientras graba, vigile cuidadosamente el rastreo en vivo para garantizar grabaciones de calidad y observe cualquier salto en la señal que indique que la funda no está lo suficientemente apretada.