Determinación de un efecto de la hormona de crecimiento de prueba en las neuronas de kisspeptina utilizando una pinza de parche de célula completa
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:28 min. • July 8th, 2025
Asegure un corte hipotalámico de ratón transgénico en una cámara de grabación perfundida con aCSF.
La rebanada contiene neuronas kisspeptina que expresan proteínas de fusión fluorescente, cruciales para la regulación del sistema reproductivo.
Ensamble una micropipeta que comprenda un electrodo de registro en una solución interna.
Localice microscópicamente una neurona de kisspeptina fluorescente.
Aplique presión positiva a la pipeta y hágala avanzar hacia la neurona objetivo. Al contacto, la presión crea una hendidura en la membrana neuronal.
Aplique una breve presión negativa, formando un sello de alta resistencia entre la micropipeta y la membrana.
Establezca el voltaje de mantenimiento en el potencial de reposo fisiológico de la neurona para obtener mediciones precisas.
Aplique breves pulsos de presión negativa para romper la membrana, estableciendo una configuración de toda la célula.
Confirme la viabilidad de la neurona mediante el monitoreo de los parámetros.
Introducir una hormona de crecimiento de prueba, desencadenando vías de señalización e induciendo cambios en el potencial de membrana de la neurona.
Medir los cambios en el potencial de membrana para determinar el efecto
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