Registro del potencial de campo local en cortes de corteza hipocampal-entorrinal de ratón

Asegure un corte de corteza entorrinal del hipocampo de ratón en una cámara de grabación sumergida.

Flujo continuo de ACSF oxigenado a una temperatura constante para mantener la viabilidad del tejido.

Coloque una pipeta de estimulación llena de una solución electrolítica dentro del estrato radiado de la región CA3 del hipocampo, que contiene neuronas que reciben información de la corteza entorrinal.

Inserte una pipeta de registro llena de ACSF en el estrato piramidal de la región CA1, que consta de neuronas que forman sinapsis con proyecciones axonales del CA3.

Con la pipeta de estimulación, aplique un pulso eléctrico para activar potenciales de acción en las neuronas CA3 presinápticas.

El potencial de acción induce la liberación de neurotransmisores, que se unen a los receptores de las neuronas CA1 postsinápticas. La unión induce la afluencia de iones, lo que lleva a un cambio en el potencial de membrana.

Los cambios combinados en el potencial de membrana de múltiples neuronas CA1 postsinápticas, denominados potencial de campo local o LFP, se registran extracelularmente mediante la pipeta de registro.

Para registrar los potenciales de campo locales, llene un vaso de precipitados de 400 mililitros con ACSF con burbujas de carbogeno y coloque un extremo del tubo de la bomba en el vaso de precipitados. Encienda una bomba peristáltica a ocho a 10 mililitros por minuto, para dirigir el ACSF desde el vaso de precipitados de 400 mililitros a un depósito calentado y desde el depósito a la cámara de registro a 32 grados Celsius.

A continuación, sujete brevemente el tubo y apague la bomba para pausar el flujo. Con unas pinzas finas, transfiera un corte de tejido cerebral a la cámara de grabación por la esquina del papel de la lente sobre el que descansa el tejido, corte hacia abajo. Retire el papel de la lente, dejando la rebanada sumergida en la cámara de grabación, y use un arpa para asegurar la rebanada.

Con un micromanipulador manual, avance lentamente la punta de una pipeta de estimulación llena de cloruro de sodio hacia la superficie de la rebanada en un ángulo de 30 a 45 grados. A continuación, utilice un segundo micromanipulador para avanzar lentamente la punta de una pipeta de potencial de campo local llena de ACSF en la región de interés en un ángulo de 30 a 45 grados, y registre el potencial de campo local de la muestra de acuerdo con los protocolos estándar.