Análisis del comportamiento del sueño en ratones a través de registros de electroencefalograma y electromiograma

Asegure un mouse anestesiado en un marco estereotáxico.

Desinfecte la piel afeitada, cubra el ratón con una cortina y haga una incisión en la línea media para exponer el cráneo.

Taladre dos agujeros en el cráneo en coordenadas estereotáxicas específicas.

Prepare una unidad de electrodo de registro con un cabezal de cuatro pines conectado a cables de acero inoxidable.

Use dos cables con tornillos como electroencefalograma o electrodos de EEG para medir la actividad eléctrica cerebral.

Use los otros dos cables como electromiograma o electrodos EMG para medir la actividad eléctrica muscular.

Atornille los electrodos de EEG en los orificios y fije el conjunto de electrodos al cráneo.

Inserte los electrodos EMG en los músculos del cuello.

Cierre la incisión con suturas y deje que el ratón se recupere.

Transfiera el mouse a una cámara de grabación insonorizada.

Conecte el conjunto de electrodos a un cable de grabación y conéctelo a un amplificador.

Registre las señales de EEG y EMG para analizar diferentes etapas del sueño y la vigilia en ratones.

Antes de comenzar, esterilice todas las herramientas quirúrgicas en un esterilizador de perlas calientes. Una vez que se confirme que el ratón está anestesiado por un pellizco en el dedo del pie, afeite el vello de la cabeza y el cuello.

A continuación, asegure el mouse al marco estereotáxico y fije la cabeza entre las dos barras para los oídos. Luego, aplique ungüento oftálmico en los ojos para evitar la sequedad. Proceda a limpiar la piel afeitada con alcohol y exfoliantes a base de yodo.

Luego, corte a lo largo de la línea media con un bisturí para exponer el cráneo y asegure la piel hacia un lado con clips para mantener abierta el área quirúrgica. Con un cortador de carburo con un taladro de 0,8 milímetros, haga dos agujeros. Coloque un orificio sobre el área cortical frontal. Coloque el segundo orificio sobre el área parietal del hemisferio derecho.

A continuación, con un destornillador de joyero, atornille tornillos de registro de EEG de acero inoxidable en los orificios. Inserte los tornillos con solo dos o dos vueltas y media para obtener un posicionamiento epidural sobre la corteza. Los tornillos no deben moverse una vez insertados. Esto es muy importante.

Ahora, fije el conjunto de electrodos con los pines hacia arriba hasta el cráneo. Los electrodos deben colocarse en línea recta. Use un hisopo de algodón para ayudar a asegurar la posición de los electrodos y pegue el electrodo con cianoacrilato, seguido de cemento dental.

A continuación, haga pequeños agujeros en el trapecio e inserte el electrodo EMG en esos agujeros. Luego, sutura la piel con hilo de seda de 0,1 milímetros de diámetro. Ahora retire el mouse del marco estereotáxico y colóquelo en una almohadilla térmica.

Administre al ratón inyecciones intraperitoneales de ampicilina y meloxicam, y controle al ratón hasta que recupere la decúbito esternal. Luego, aloja al ratón solo.

Una semana después de implantar los electrodos, transfiera el ratón a una jaula experimental en una cámara de grabación insonorizada. Asegure el conjunto de electrodos de EEG / EMG en el mouse a un cable de grabación conectado a un anillo colector.

Conecte el cable convertidor AD a un amplificador de filtro de señal EEG/EMG conectado al anillo colector. Use un convertidor AD para convertir la señal en una señal digital de 128 hercios y, finalmente, grabe la señal en una computadora.

Habitúe al ratón durante dos o tres días en la cámara de grabación. Inicie el software de grabación de EEG/EMG. Para comenzar, haga clic en la pestaña de información del archivo de datos y haga clic en la casilla junto al nombre del archivo. Introduzca un nombre de archivo y haga clic en Guardar. Luego, en la pestaña de condiciones de grabación, seleccione todos los canales de EEG / EMG, que deben grabarse. Además, seleccione la frecuencia de muestreo en esta pestaña.

Ahora, en la pestaña de información del canal, verifique si los canales seleccionados se muestran correctamente. Una vez confirmado, inicie el registro seleccionando primero la pestaña de configuración del temporizador. A continuación, haga clic en Monitor para mostrar EEG y EMG. Si las señales se muestran correctamente, configure la hora del reloj para el comienzo y el final de la grabación en el área principal del temporizador. Luego, haga clic en el botón del monitor para iniciar la grabación.