JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 3:11 min • July 8th, 2025
Coloque una placa de Petri que contenga una larva de Drosophila disecada con músculos expuestos y ramas nerviosas en la platina del microscopio.
Inserte un electrodo de referencia en una solución de baño dentro de la placa de Petri.
Llene un electrodo de registro con una solución isotónica.
Usando un micromanipulador, coloque este electrodo sobre un músculo abdominal inervado por neuronas motoras.
Coloque la punta del electrodo en un bouton sináptico, una estructura en la punta del axón que contiene neurotransmisores.
Registre continuamente corrientes de unión excitatorias en miniatura o mEJC, que son respuestas a la liberación espontánea de neurotransmisores.
El rango correcto de amplitud de mEJC confirma el posicionamiento adecuado del electrodo.
A continuación, coloque un electrodo de estimulación cerca del axón que inerva el músculo objetivo.
Aplique presión negativa para tirar del axón dentro del electrodo.
Aumente gradualmente la corriente de estimulación para inducir un potencial de acción.
Esto hace que el axón libere neurotransmisores en la unión neuromuscular, que se registran como corrientes sinápticas.
Coloque la placa de Petri con la preparación en la platina del microscopio. Inserte el electrodo de referencia en el baño. Llene el electrodo de registro con solución HL3. Debajo del objetivo 10x, sumerja el electrodo en el baño y colóquelo sobre los músculos seis y siete de los segmentos abdominales 2, 3 o 4 usando el micromanipulador.
A continuación, cambie el objetivo a 60X y concéntrese en el área de interés utilizando la óptica epiflorescencia o DIC. Coloque la punta del electrodo encima de los botones sinápticos, luego, presione el electrodo muy suavemente sobre el músculo, ya que una presión excesiva puede dañar la NMJ o inducir un aumento en la actividad sináptica espontánea.
A continuación, encienda el amplificador, la placa AD y la computadora. Luego, elija el modo de pinza de voltaje en el amplificador. Inicie el software de adquisición, elija el modo sin espacios y observe la apariencia de los mEJC en la pantalla de la computadora. Asegúrese de que la amplitud de los mEJC esté en el rango de 0,2 a 0,7 nanoamperios.
Usando un micromanipulador bajo un control visual, coloque el electrodo de estimulación cerca del axón que inerva los segmentos abdominales 2 a 4. Aplique presión negativa tirando del pistón de la jeringa conectado al portaelectrodos, de modo que el axón se introduzca dentro del electrodo.
A continuación, encienda el estimulador. Gire la perilla de la unidad de aislamiento para establecer una corriente cero y luego auméntela suavemente hasta que aparezcan los EJC o hasta que se alcance el umbral. Realice la estimulación en un régimen supraumbral, con la corriente de estimulación aumentada aproximadamente el doble en comparación con el umbral para la observación de EJC.