Registros electroencefalográficos concurrentes y de potencial de campo local en una rata anestesiada

Asegure una rata anestesiada a un marco estereotáxico con el cráneo expuesto.

La rata tiene un orificio en el cráneo con la duramadre perforada, una incisión en el cuello y electrodos estimulantes conectados a sus almohadillas de bigotes.

Fije un electrodo de araña electroencefalograma, o EEG, untado con pasta conductora en el cráneo, manteniendo despejado el orificio de la rebaba.

El electrodo de araña mide el EEG de superficie, reflejando la actividad neuronal general del área cortical debajo de él.

Monte un microelectrodo lineal multicanal en un micromanipulador.

Inserte el microelectrodo en la corteza cerebral a través del orificio de la rebaba a una profundidad de 1500 micrómetros.

El microelectrodo mide el potencial de campo local, o LFP, que refleja la actividad neuronal cortical.

Coloque los electrodos de referencia EEG y LFP dentro de la incisión del cuello.

Conecte los electrodos de grabación y referencia a un preamplificador conectado a una unidad de adquisición de datos.

Aplique estímulos eléctricos a las almohadillas de los bigotes y ajuste la profundidad del microelectrodo para maximizar la amplitud LFP evocada. Registre las señales de EEG y LFP colocalizadas.

En este procedimiento, limpie y seque el cráneo que rodea el orificio de la rebaba con un hisopo de algodón. Aplique con cuidado la pasta conductora de EEG en un lado plano de un electrodo de araña de EEG. Deje un pequeño orificio libre de pasta de EEG en el electrodo de araña para permitir que un microelectrodo multilaminar pase a través del orificio sin entrar en contacto con la pasta y el electrodo de araña.

Alinee el electrodo de araña con el orificio de la rebaba en el cráneo con la pasta de EEG hacia el cráneo. Presione con cuidado el electrodo de araña sobre el cráneo, haciendo contacto firme con el cráneo a través de la pasta de EEG.

Retire cualquier pasta que oscurezca el orificio de la rebaba con una aguja en una jeringa y elimine el exceso de pasta de EEG más allá de la periferia del electrodo de araña, de modo que el contacto entre el electrodo de araña y el cráneo esté restringido espacialmente al tamaño del electrodo. Luego, unte pasta de EEG en el electrodo de referencia para el EEG y colóquelo de forma segura dentro de la incisión en la parte posterior del cuello de la rata.

A continuación, conecte los electrodos de EEG al preamplificador a través de un divisor de señal pasivo para señales de baja impedancia. En esta etapa, pruebe la resistencia de la sonda de EEG para asegurarse de que esté por debajo de los cinco kiloohmios. De lo contrario, agregue más pasta de EEG y asegúrese de que el electrodo de araña haga un buen contacto con el cráneo.

Posteriormente, monte un brazo micromanipulador en el marco estereotáctico. Conecte un microelectrodo lineal de 16 canales a una platina de cabeza aguda de 16 canales enganchada de forma segura en el brazo del micromanipulador. Luego, unte pasta de EEG en el electrodo de referencia para el microelectrodo y luego colóquelo de forma segura dentro de la incisión junto al electrodo de referencia para el EEG. Ajuste el ángulo del brazo del micromanipulador para que el microelectrodo quede perpendicular a la superficie cortical.

Ahora, baje el microelectrodo bajo un microscopio para que la punta del microelectrodo apunte a la pequeña abertura en la parte inferior del orificio de la rebaba, hasta que el electrodo superior penetre en la superficie cortical. Se debe tener cuidado para evitar forzar el microelectrodo sobre la superficie de la duramadre, ya que esto rompería el electrodo.

Inserte el microelectrodo en la superficie cortical a una profundidad de 1500 micrómetros. Microajuste la profundidad aplicando un tren de estímulos a la almohadilla de bigotes y observando el LFP evocado de 16 canales en un monitor de PC. Gire con cuidado la perilla del eje z en el micromanipulador hasta que se produzca la mayor amplitud del LFP evocado, ya que coincide con la capa 4 en la corteza.