Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:20 min. • July 8th, 2025
Comience con una configuración de electrofisiología que contenga un segmento de colon de ratón inmovilizado en una solución electrolítica equilibrada.
El colon tiene un ganglio pélvico principal expuesto con una rama nerviosa sensorial aferente del colon previamente diseccionada que transmite señales desde el colon al cerebro.
El colon está canulado en ambos extremos con válvulas de tres vías para infusión de solución salina.
Llene el electrodo de registro y colóquelo cerca del nervio aferente.
Aplique una succión suave para tirar del nervio hacia el electrodo, formando un sello hermético.
Monitorear la señal eléctrica nerviosa de referencia y la presión interna del colon.
Cierre el grifo de la cánula de salida mientras infunde continuamente la solución salina en el colon.
Esto provoca un aumento gradual de la presión dentro del colon, lo que resulta en la distensión del colon y estimula el nervio aferente.
Vuelva a grabar la señal nerviosa y la presión del colon.
Un aumento gradual de la señal nerviosa con el aumento de la presión confirma la estimulación nerviosa aferente.
Inspeccione una pipeta de vidrio preextraída bajo el microscopio de disección. Romper la punta del electrodo con un par de pinzas, para que tenga un tamaño compatible con el diámetro del nervio a registrar. Después de eso, bisela la punta colocándola cerca de un destello más ligero.
Las personas nuevas en esta metodología también pueden tener dificultades para biselar la punta del electrodo compatible con el tamaño del nervio.
A continuación, coloque el electrodo biselado en el soporte del electrodo. Luego, conecte una jeringa de 10 mililitros al puerto lateral del soporte para la aplicación de presión negativa o positiva al electrodo. Después de eso, conecte el soporte a la etapa de cabeza del bioamplificador y monte la etapa de cabeza en un manipulador.
Después de esto, mueva el electrodo al baño de tejidos y llene el electrodo con la solución de Krebs aplicando una succión suave, hasta que haga contacto con el cable plateado del soporte. Luego, coloque la punta del electrodo cerca del extremo cortado del nervio y aplique presión negativa para succionar el nervio hacia el electrodo. Luego, aplique más presión negativa para que aproximadamente 1 milímetro del nervio se introduzca en el electrodo y forme un sello hermético.
Ahora, encienda el bioamplificador y configure el filtro de 300 a 3,000 hercios. Monitoree la señal en el osciloscopio y registre la señal nerviosa y la señal de presión intraluminal en el software de procesamiento de datos Spike. A continuación, aplique la distensión de rampa del colon cerrando el grifo de tres vías en la cánula de salida mientras infunde continuamente por vía intraluminal. Controla la presión intraluminal hasta que alcance los 60 milímetros de mercurio.