Evaluación de la función mitocondrial en células endoteliales vasculares cerebrales

0 views • 2:43 min • July 8th, 2025

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Comience con células endoteliales vasculares cerebrales o CVE en medios de cultivo.

Las células CVE son células de alta demanda de energía que recubren los vasos sanguíneos del cerebro y son esenciales para la fisiología cerebral.

Coloque las células en una placa de cultivo de células de flujo extracelular. Incubar para la fijación celular.

Reemplace los medios de cultivo con medios de ensayo de flujo extracelular que tengan el pH deseado.

Incubar sin dióxido de carbono para mantener el pH.

A continuación, tome un cartucho de sensor de flujo extracelular, que incluye sensores y una placa inferior.

Agregue una solución de calibración a la placa e incube sin dióxido de carbono para hidratar los sensores.

Estos sensores pueden medir los cambios en la concentración de oxígeno en el entorno extracelular, indicativos de actividad mitocondrial.

Luego, cargue el cartucho en una máquina bioanalizadora y calibre los sensores.

Reemplace la placa inferior con la placa que contiene las celdas.

Medir la función mitocondrial de las células CVE.

Después del número apropiado de subcultivos, siembre 1,6 x 104 células en 80 microlitros de medio completo por pocillo en una placa de cultivo celular de flujo extracelular de 96 pocillos y coloque la placa en una incubadora de 37 grados Celsius con dióxido de carbono al 5%.

El día antes del ensayo de evaluación funcional mitocondrial, hidratar un cartucho sensor de flujo extracelular con 150 microlitros de solución calibrante de flujo extracelular e incubar la placa durante la noche a 37 grados Celsius sin dióxido de carbono.

A la mañana siguiente, use la estación de lavado de placas para cambiar el medio de cultivo celular a un medio de ensayo de flujo extracelular de pH 7.0, luego, incube las células a 37 grados Celsius sin dióxido de carbono durante 30 a 60 minutos. Cuando las células se hayan equilibrado, cargue el cartucho hidratado en el bioanalizador y haga clic en el botón Inicio para comenzar la calibración.

Al final de la calibración, haga clic en el indicador Desbloquear cartucho para quitar la placa inferior del cartucho y cargue la placa de celda, luego abra el archivo de datos para obtener los valores de velocidad del bioanalizador para exportarlos al archivo de hoja de cálculo.

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Last updated: 18 July 2026