Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:50 min. • July 8th, 2025
Comience con una cámara de registro que contenga un segmento disecado de un yeyuno de ratón, una parte del intestino delgado, sumergido en una solución electrolítica y asegurado con un alfiler.
El segmento yeyunal incluye tejido graso circundante con un nervio aferente mesentérico predisecado, que transmite señales desde el yeyuno al cerebro.
El segmento está conectado a los puertos de entrada y salida de la cámara para el flujo de la solución.
Tome un electrodo de succión conectado a un micromanipulador y una unidad de registro.
Llene el electrodo de succión con la solución electrolítica y colóquelo cerca del nervio aferente mesentérico.
Aplique una succión suave para tirar del nervio con el tejido graso circundante para formar un sello hermético.
Cierre el puerto de salida mientras mantiene el flujo de entrada para aumentar gradualmente la presión interna y la distensión del segmento yeyunal.
Esto provoca la excitación del nervio aferente mesentérico alrededor del yeyuno, generando una señal eléctrica.
Registrar la actividad del nervio aferente en respuesta a los cambios de presión yeyunal.
En este procedimiento, utilizando un micromanipulador, baje la punta del electrodo de succión al baño de órganos. Luego, aspire suavemente un poco de solución de Krebs del baño del órgano para que la punta del electrodo se sumerja en la solución de Krebs. Asegúrese de que la solución de Krebs cubra el electrodo de alambre dentro del electrodo de succión.
A continuación, coloque la punta del electrodo de succión inmediatamente al lado de la hebra del nervio aferente seccionada y tire de la hebra del nervio seccionado hacia el capilar en toda su longitud. Maniobre la punta del electrodo hacia el tejido adiposo y aspírelo hacia el capilar de vidrio con el émbolo, sellando así mecánicamente el nervio en el capilar del contenido del baño del órgano.
Para verificar el registro de la actividad del nervio aferente, realice un aumento de la activación aferente inducido por la distensión de rampa cerrando el puerto de salida para conducir a un aumento gradual de la presión en el segmento intestinal. Solo realice el protocolo experimental deseado cuando tres distensiones de rampa consecutivas produzcan una descarga reproducible de varias unidades.