Implantación de un conjunto de electrodos en el cerebro de un ratón para su registro electrofisiológico

Asegure un ratón anestesiado en un marco estereotáxico que contenga una almohadilla térmica para mantener la temperatura corporal.

Aplique lubricante para evitar que los ojos se sequen e inyecte una solución electrolítica por vía subcutánea para mantener la hidratación.

Retire el pelaje del cuero cabelludo, desinfecte el área e inyecte un analgésico por vía subcutánea para reducir el dolor.

Haga una incisión para exponer el cráneo, luego límpielo para que los puntos de referencia anatómicos sean visibles para identificar las regiones del cerebro.

Aplique adhesivo dental y endurezca con una lámpara de polimerización para ayudar en la implantación de electrodos.

Taladre agujeros sobre el hipocampo y el cerebelo, y monte un conjunto de electrodos usando un soporte en el marco estereotáxico.

Los electrodos bipolares registran la actividad del hipocampo, mientras que un electrodo de referencia obtiene la actividad de referencia del cerebelo.

Inserte los electrodos, asegure el conjunto con cemento dental y desconéctelo del soporte.

Administre la solución electrolítica y un analgésico nuevamente.

Deje que el mouse se recupere por completo antes de realizar el registro electrofisiológico.

Antes de continuar con la cirugía, registre el peso de los ratones VGAT-Cre de 8 semanas de edad. Luego, coloque al animal en una cámara de inducción para inducir la anestesia. Coloque el ratón anestesiado en una almohadilla térmica a 37 grados centígrados. Si usa un sistema de temperatura controlado por retroalimentación, inserte la sonda de temperatura en el recto del animal para controlar la temperatura durante la cirugía. Para comenzar la cirugía, redirija el flujo de anestesia inhalante al cono de la nariz y monte al animal en el marco estereotáxico colocando suavemente los dientes superiores frontales en la barra incisiva y mueva el cono hacia su nariz, luego coloque las barras de los oídos en los oídos y fíjelas al marco estereotáxico.

Asegúrese de que la cabeza del animal esté nivelada y centrada y que no se pueda mover cuando se sondea ligeramente. Una vez montado el animal, inyectar 0,5 mililitros de normosol en los ratones para hidratarlos y aplicar lubricante ocular para evitar que se seque la córnea. Controle la profundidad de la anestesia pellizcando un dedo del pie de la extremidad posterior. Si el reflejo de abstinencia está ausente en el animal, proceda a eliminar el pelo del cuero cabelludo del ratón alrededor del área quirúrgica. Cuando haya terminado, desinfecte el área limpia de la piel tres veces con una aplicación alterna de etanol y yodo terminando con yodo, e inyecte 0,05 mililitros de bupivacaína al 0,25% por vía subcutánea.

Haga una incisión en el cráneo con un bisturí y luego, corte una parte de la piel con unas tijeras quirúrgicas exponiendo el cráneo. Empuje la piel a un lado antes de limpiar el cráneo de todos los tejidos subyacentes con un hisopo de algodón. Limpie el cráneo con peróxido de hidrógeno con hisopos de algodón estériles y haga visibles las suturas del cráneo, el bregma y la lambda. Con el taladro montado estereotáxicamente, mueva la punta del taladro a bregma y cero coordenadas x, y y z, luego, levante y mueva el taladro a lambda para determinar sus coordenadas para determinar si la cabeza está nivelada.

Después de secar bien el cráneo, aplique una gota de adhesivo dental autograbante con el aplicador. Espere 60 segundos antes de curar el adhesivo dental con una luz ultravioleta dental durante 40 segundos. Una superficie brillante indica que el adhesivo se ha reticulado efectivamente con el cráneo. Con la ayuda de una broca de 0.031 pulgadas, taladre con cuidado dos orificios bilateralmente en el cráneo a 5,000 rotaciones por minuto, o RPM, evitando perforar el cerebro. Aplique una gota de solución salina para mejorar la perforación de los orificios de las rebabas. Para la implantación de electrodos de profundidad del hipocampo, perforar a 3 milímetros posteriores y 3 milímetros laterales del bregma.

Taladre un orificio para el electrodo de referencia por encima del cerebelo, detrás de la lambda a 6 milímetros posteriores y 0 milímetros laterales del bregma. A continuación, monte el pedestal de seis pines con electrodos ensamblados en el soporte de electrodos en un marco estereotáctico. Al alinear los electrodos sobre los orificios de las rebabas correspondientes, baje lentamente y navegue por el auricular para ubicar las dos puntas de los electrodos bipolares justo encima de los orificios de las rebabas del hipocampo izquierdo y derecho y, si es necesario, ajuste el electrodo de referencia para que flote sobre el orificio, sobre el cerebelo.

Cuando los electrodos de torsión del hipocampo estén justo encima de los orificios, ponga a cero el eje z y baje lentamente el electrodo a menos tres milímetros en el hipocampo derecho e izquierdo, y guíe el electrodo de referencia hacia el orificio sobre el cerebelo. Prepare el cemento dental mezclando el polvo y el líquido en un recipiente para mezclar, luego cubra la superficie del cráneo, los electrodos y el espacio entre la superficie del cráneo y la parte inferior del pedestal con cemento dental.

Una vez que el cemento se seque y endurezca, separe el soporte del electrodo del brazo estereotáctico, levante el brazo y retire el soporte del pedestal. Después de administrar al ratón por vía subcutánea ketoprofeno y normosol, retire al animal del marco estereotáctico para moverlo a la almohadilla térmica en la jaula del vivero. Una vez que esté completamente despierto, regrese al animal individual a la jaula del vivero, alimente al animal con alimentos blandos y controle la pérdida de peso diariamente hasta 72 horas después de la cirugía.