Prueba de la función nerviosa sensorial en un modelo de ratón denervado quirúrgicamente

Comience con un ratón anestesiado con piel dorsal expuesta. Desinfecte el área y cúbrala.

Haga una incisión en la línea media desde el cuello hasta justo por encima de la cola.

Tire de la piel del lado izquierdo para crear un colgajo de piel y exponer el tejido subyacente.

Coloque el ratón bajo un microscopio y localice los nervios sensoriales.

Tire y retire con cuidado estos nervios sin alterar los vasos sanguíneos.

Humedezca el tejido y retire los nervios restantes del colgajo de piel, creando un área denervada.

En el lado derecho, deje los nervios intactos como control. Sutura la incisión de la piel.

Deje que el mouse se recupere.

Para evaluar la denervación estable varias semanas después de la cirugía, use el mismo ratón denervado con piel dorsal afeitada.

Con una aguja, pinchar en la zona de control, generando una estimulación mecánica.

Esto excita los nervios subyacentes, enviando una señal al cerebro y haciendo que el ratón responda.

Sin embargo, pinchar el área denervada no genera una respuesta, lo que confirma el papel de los nervios sensoriales.

Anestesiar al animal. Afeite toda la piel dorsal y limpie el área de manera similar al procedimiento de biopsia. Ahora, haga una incisión con un bisturí estéril a lo largo de la línea media dorsal desde la base del cuello, hasta aproximadamente medio centímetro por encima de la cola. Con unas pinzas romas estériles, refleje suavemente la piel del lado izquierdo lejos del flanco, para visualizar el tejido subyacente desde las almohadillas de grasa escapular cerca del cuello hasta justo encima de la extremidad trasera.

Ahora, identifique los nervios cutáneos dorsales bajo un microscopio óptico de disección. Estos aparecen como hebras blancas que viajan caudalmente a través de la fascia translúcida de la pared del tronco antes de hacer curvas cerradas y entrar en el tejido conectivo suelto debajo de la piel. A continuación, con unas pinzas ultrafinas, retire los nervios exclusivamente del lado izquierdo del animal situados en los sitios anatómicos T3 a T12 arrancándolos desde donde sus segmentos se doblan en la pared del tronco hasta sus sitios de entrada en la piel.

Oriente las pinzas verticalmente y agarre los nervios aproximadamente medio centímetro por debajo de sus sitios de flexión. Una vez agarrado, tire hacia arriba para hacer que el nervio se estire y se separe del tejido circundante para eliminarlo. Evite dañar los vasos sanguíneos adyacentes. Asegúrese de mantener el tejido húmedo durante todo el procedimiento aplicando periódicamente gotas de solución salina estéril al 0,9%.

Continúe eliminando todos los nervios que se extienden desde la pared del tronco hasta la piel, pero no interrumpa los nervios dentro de la densa fascia de la pared del tronco. A continuación, retire los nervios del colgajo de piel expuesto. Estas fibras comprenden las ramas distales de los nervios cutáneos dorsales y aparecen como hebras ramificadas blancas ubicadas esporádicamente dentro del tejido conectivo en el lado dérmico del colgajo de piel.

Para eliminar estas ramas finas, coloque las pinzas aproximadamente paralelas a la superficie dérmica, agarre los nervios y tire hacia arriba. Elimina todos los nervios visibles de esta manera. No perfore los vasos sanguíneos ni la piel.

Durante este paso, es importante evitar la ruptura de los vasos sanguíneos vecinos. Si encuentra un nervio con un vaso sanguíneo adyacente, sígalo ventralmente hasta un área donde no haya un vaso adyacente y elimínelo arrancando.

Ahora, refleje sin rodeos la piel en el lado derecho de la incisión dorsal de la línea media, pero no elimine ningún nervio. Esto servirá como control contralateral operado por simulación. Finalmente, sutura al animal y monitorea postoperatoriamente como antes. Más tarde, para confirmar la pérdida estable de nervios semanas después de la cirugía, pinche suavemente el área denervada con una aguja hipodérmica estéril. Observe si el animal responde típicamente estremeciéndose o girando la cabeza. Si el área de la piel se ha denervado de manera estable, el animal exhibirá poca o ninguna respuesta.