Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:06 min. • July 8th, 2025
Asegure una mosca Drosophila de ojos blancos a un soporte en una arena de grabación.
Coloque una fuente de luz cerca de la mosca.
Implante el electrodo de tierra en la espalda de la mosca.
Inserte el electrodo de registro en la periferia exterior del ojo de la mosca, cerca de las células fotorreceptoras de la retina que contienen un fotopigmento.
Adapta la mosca brevemente a la oscuridad. Esto convierte la metarodopsina, la forma activada por la luz del fotopigmento, en rodopsina, su forma inactiva.
Aplique un pulso de luz naranja de alta intensidad. Esto convierte cualquier metarodopsina restante en rodopsina.
A continuación, aplique pulsos de luz azul. La luz azul convierte la rodopsina en metarodopsina, iniciando una cascada de señalización y abriendo canales iónicos específicos.
Esto induce una afluencia continua de iones positivos y una despolarización sostenida, incluso después de que se elimina la luz azul, el pospotencial de despolarización prolongado, o PDA, registrado por el electrodo.
Ahora, vuelva a aplicar los pulsos de luz naranja para convertir la metarodopsina en rodopsina.
Esto detiene la cascada de señalización, termina el CAP y repolariza la membrana del fotorreceptor.
Coloque el soporte para moscas en una jaula oscura de Faraday sobre un bloque magnético y asegúrese de que la mosca esté aproximadamente a cinco milímetros del extremo de la guía de luz. Coloque el electrodo de grabación sobre el ojo de la mosca y el electrodo de tierra sobre la parte superior de la espalda de la mosca usando los micromanipuladores. Luego, inserte el electrodo de tierra en la parte posterior de la mosca usando los micromanipuladores.
Inserte el electrodo de registro en la periferia exterior del ojo de la mosca, preferiblemente utilizando los micromanipuladores. Cierre la jaula de Faraday y apague las luces de la habitación para permitir la adaptación a la oscuridad durante cinco minutos. Introduzca los parámetros, a partir de una duración de pulso de 500 metros por segundo, un intervalo de pulso de 60 segundos y el número de pulsos establecido en seis.
Para medir el PDA, configure el generador de pulsos de velocidad maestra en el modo Tren. Luego, dé un pulso de luz de 5 segundos de máxima intensidad usando un filtro naranja. Verifique la respuesta de voltaje. Reemplace el filtro naranja con un filtro azul de banda ancha y emita tres pulsos de luz de 5 segundos a máxima intensidad. Verifique la respuesta de voltaje.
Espere al menos 60 segundos en la oscuridad. Sustituye el filtro azul por el filtro naranja anterior. Luego, dé dos pulsos de luz de 5 segundos con intervalos de 60 segundos. Verifique la respuesta de voltaje.