Registro de potenciales postsinápticos excitatorios del campo neuronal en cortes agudos del hipocampo

Coloque una rodaja de hipocampo de ratón en una cámara de inmersión llena de líquido cefalorraquídeo artificial o aCSF.

Asegure la rebanada con una malla de sujeción para evitar movimientos.

Circule continuamente aCSF oxigenado para mantener la viabilidad neuronal.

Instale electrodos de referencia para proporcionar una referencia de voltaje estable.

Coloque los electrodos de estimulación y registro en línea y paralelos al estrato piramidal CA1 del hipocampo.

Aplicar pulsos eléctricos.

Estos pulsos estimulan las neuronas, lo que hace que se abran canales iónicos dependientes de voltaje, lo que permite que los iones positivos fluyan y desencadenen potenciales de acción.

Estos potenciales de acción se propagan a lo largo de las neuronas e inducen la liberación de neurotransmisores excitadores en la hendidura sináptica.

Los neurotransmisores se unen a receptores específicos en las neuronas postsinápticas, lo que permite la afluencia de iones positivos y da como resultado un cambio en el potencial de membrana: el potencial postsináptico excitador o EPSP.

El electrodo de registro mide el EPSP de una población de neuronas dentro de la región de registro: el campo EPSP.

Remoje previamente un pequeño trozo de papel de limpieza de lentes y una malla de nailon fijada en un alambre de platino en forma de U en la cámara de corte de inmersión durante unos minutos. Después de eso, retire el alambre de platino en forma de U. Apague el reciclaje y coloque una rebanada en el papel de limpieza de lentes. Luego, coloque inmediatamente la malla que sostiene la rebanada encima de la rebanada.

Encienda la bomba y deje que la loncha se equilibre durante 30 minutos sin sumergir el objetivo en ACSF. Mientras tanto, llene el electrodo de registro con ACSF y móntelo en el soporte de la pipeta.

A continuación, coloque el electrodo de estimulación de tungsteno con aislamiento epoxi probado en el soporte del manipulador y el cable de referencia en la cámara de corte. Agregue un segundo electrodo de referencia a la cámara y conéctelo al zócalo de referencia de la etapa de cabeza del electrodo de registro.

En el software de control del amplificador, haga clic en el cuadro Modo de pinza cero, luego haga doble clic en el cuadro Lista de ganancia de salida. Elija una ganancia de 100. Haga doble clic en el cuadro de filtro de paso alto situado en la parte inferior. Elija 3 kilohercios y haga doble clic en el cuadro de lista Filtro de paso bajo AC para elegir 0,1 hercios.

En el software de grabación, haga clic en Adquirir protocolo abierto. Elija un protocolo que tenga la configuración que permita estimulaciones episódicas y la digitalización de potenciales amplificados a 10 a 20 kilohercios durante 50 a 100 milisegundos, y que active automáticamente un aislador de estímulo 10 milisegundos después del inicio de una grabación episódica.

Coloque los electrodos de estimulación y registro en línea y paralelos al estrato piramidal. Posteriormente, haga clic en Adquirir protocolo de edición y elija la pestaña Activador en la ventana emergente. Haga clic en el cuadro Origen del desencadenador y elija Barra espaciadora como origen del desencadenador. Luego, haga clic en el botón Aceptar y haga clic en el botón Grabar para iniciar la adquisición.

En el software del aislador de estímulo, haga clic en el cuadro de control de voltaje e ingrese cero. Haga clic en el botón Descargar. A continuación, haz clic en la ventana Software de grabación y pulsa la barra espaciadora. Repita este ciclo introduciendo secuencialmente valores de 1.000 a 8.000. Correlacione la fuerza de estimulación con los valores de pendiente FEPSP y determine la fuerza de estimulación requerida para obtener el 40% del máximo de pendiente FEPSP. Haga clic en el cuadro Control de voltaje e ingrese el valor determinado. Luego, haga clic en el botón Descargar.

En el software de grabación, haga clic en el botón Detener y luego en el menú Adquirir. Haga clic en Editar protocolo y elija la pestaña Activador en la ventana emergente. Luego, haga clic en el cuadro Fuente de activación y elija el temporizador interno como fuente de activación. Haga clic en el botón Aceptar, seguido del botón Grabar que inicia el registro automático de potenciales de campo cada 60 segundos. Haga clic en el botón Detener después de 30 a 60 minutos.

En el software de grabación, haga clic en Adquirir protocolo abierto y elija el mismo protocolo que la grabación de referencia. Haga clic en el botón Aceptar y, a continuación, haga clic en Grabar. Siga ejecutando automáticamente las grabaciones de potencial de campo durante dos a cuatro horas. Cuando haya terminado, haga clic en el botón Detener para finalizar la grabación.