Generación de oscilaciones gamma locales de Cornu Ammonis 1 (CA1) mediante estimulaciones tetánicas en un corte de cerebro del hipocampo

Asegure un corte de cerebro en una cámara de registro con una perfusión continua de aCSF que contenga un alto contenido de magnesio que bloquee los receptores de glutamato N-metil-D-aspartato o NMDA.

Coloque los electrodos de estimulación y registro en el estrato radiatal del hipocampo Cornu amonis 1 o CA1.

Estimular para obtener una señal eléctrica, confirmando conexiones neuronales intactas.

Vuelva a colocar el electrodo estimulante en el estrato oriens y el electrodo de registro en el estrato piramidal, luego insértelos más profundamente.

Aplicar estimulaciones tetánicas, pulsos eléctricos de alta frecuencia para inducir la liberación del neurotransmisor excitador glutamato de los axones colaterales de Schaffer.

El glutamato se une a los receptores de glutamato en las neuronas CA1, lo que facilita la entrada de sodio y la despolarización de la membrana.

Esto desbloquea los receptores NMDA, lo que permite la entrada de sodio y calcio y mejora la excitación neuronal.

Las interneuronas excitadas en el estrato oriens liberan el neurotransmisor inhibidor GABA, interactuando con las neuronas CA1.

Este equilibrio de entradas excitatorias e inhibitorias conduce a una excitación controlada sincronizada de la red neuronal CA1, generando ondas cerebrales rítmicas llamadas oscilaciones gamma, cruciales para la atención y la memoria.

Para montar la rebanada en la cámara de grabación, coloque una rebanada de cerebro en una cámara de grabación sumergida perfundida con ACSF que fluye a 1 a 2 mililitros por minuto y se calienta a 32 grados Celsius. El ACSF utilizado para los registros difiere del de la cámara de retención, ya que la concentración de magnesio aumenta de 2 milimolares a 4 milimolares.

Asegure la rebanada colocando un peso semicircular de acero inoxidable sobre ella con sus hebras paralelas al hipocampo CA1. Después de eso, aumente la velocidad de perfusión a 8 a 10 mililitros por minuto a 32 grados centígrados.

Con un microscopio de disección, mueva el electrodo estimulante al centro del estrato oriens. Luego, mueva el electrodo de registro a la capa piramidal lo más cerca posible del electrodo estimulante. Posteriormente, baje los electrodos de estimulación y registro de 50 a 100 micrómetros en el corte para generar el campo EPSP de 1 milivoltio en respuesta al pulso de prueba de 120 a 150 microamperios.

Para generar oscilaciones gamma, estimule el tejido con un tren de pulsos de 20 veces 0,1 milisegundos administrados a 200 hercios. Este estímulo tetánico puede producir respuestas reproducibles cuando se administra cada 5 minutos.