JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 3:10 min • July 8th, 2025
Comience con un ratón anestesiado y adaptado a la oscuridad.
Aplicar gotas anestésicas y dilatadoras en la córnea.
Coloque el mouse en una plataforma elevada frente a una cúpula con una luz roja tenue.
Asegure un electrodo de tierra por vía subcutánea en la pata trasera y un electrodo de referencia dentro de la boca.
Tome un portaelectrodos con un capilar lleno de solución salina. Desliza para eliminar las burbujas de aire.
Llene completamente la punta capilar con la solución salina.
Coloque el capilar en la córnea para registrar un electrorretinograma de acoplamiento directo o DC-ERG.
El DC-ERG mide las respuestas eléctricas sutiles del epitelio pigmentario de la retina o EPR.
El EPR es una monocapa celular especializada que mantiene la salud y la integridad estructural de las células fotorreceptoras.
Aplique una gota de lubricante para los ojos para mantener la conductividad y prevenir la desecación.
Verifique los valores de resistencia de cada ojo para asegurarse de que sean similares y estén dentro del rango.
Establezca una línea de base estable y luego comience a grabar el DC-ERG.
Para colocar el ratón y los electrodos para un experimento, anestesiar la córnea de un ratón sedado con una gota de ácido clorhídrico de proparacaína al 0,5% antes de dilatar la córnea con una gota de fenilefrina HCl al 2,5% y tropicamida al 0,5%.
Utilice el paso uno de seis para encender una luz roja tenue dentro del domo y coloque el mouse sobre una mesa de grabación con calefacción. Use fórceps para cubrir con cuidado la piel de la pata trasera y, con una mano para sujetar firmemente el electrodo de aguja, use la otra mano para insertar el electrodo por vía subcutánea en la pata trasera para asegurar el electrodo en su lugar.
Coloque el electrodo de plata/cloruro de plata de referencia en la boca del animal de modo que el gránulo centrado descanse a lo largo de la mejilla posterior y se mantenga en su lugar detrás de los dientes.
Antes de colocar los electrodos capilares en el ojo, coloque el portaelectrodos con los capilares de vidrio orientados verticalmente y golpee el portaelectrodos con el dedo índice para eliminar las burbujas que puedan haberse introducido.
Use una aguja de calibre 25 para llenar las puntas de los capilares con HBSS e inspeccione los capilares para asegurarse de que no haya burbujas de aire atrapadas en las puntas. Coloque el soporte del electrodo de modo que las puntas abiertas de los capilares llenos de HBSS estén en contacto suave con la córnea y, teniendo cuidado de evitar la introducción de burbujas, invierta el dispensador de gel lubricante para los ojos para desechar las gotas iniciales. Luego, coloque una gota de gel lubricante para los ojos en cada ojo para mantener la conductividad y evitar la desecación durante la grabación.