Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:53 min. • July 8th, 2025
Monte una mosca Drosophila viva en un tubo con la cabeza expuesta, las antenas adheridas a una cinta adhesiva y aseguradas con una varilla de sujeción.
Mantenga la preparación bajo un flujo constante de aire humidificado para evitar la desecación.
Inserte el electrodo de referencia a través del clípeo, una estructura de soporte que protege las piezas bucales, para llegar al sistema circulatorio.
Coloque el electrodo de registro cerca del sensillum, el órgano sensorial del insecto.
Inserte el electrodo en la base del sensillum.
Registre señales con picos específicos para confirmar el posicionamiento correcto del electrodo cerca de las neuronas receptoras olfativas.
Conecte un cartucho que contenga el odorante de prueba al tubo de suministro.
Coloque el tubo apuntando a la antena de la mosca, ajustando la altura y la distancia de los electrodos.
Con el software, configure el caudal de olor y la cantidad de dosis, luego libere el odorante.
Ahora, registre las señales eléctricas para capturar la respuesta neuronal de la mosca al odorante.
Para realizar grabaciones, inserte el electrodo de referencia en el clípeo con un movimiento rápido y suave. Colóquelo justo debajo de la cutícula donde estará en contacto con la hemolinfa. A continuación, baje lentamente el electrodo de registro hasta que entre en el mismo plano de visión que el sensillum objetivo. Luego, inserte el electrodo de registro en la base sensilar.
Antes de continuar, asegúrese de que haya una alta relación señal-ruido, con picos identificables de las neuronas at4A y at4C. La neurona at4A no debe dispararse a más de 20 hercios.
Ahora, conecte el cartucho al tubo de suministro de odorante. En este caso, se adjunta un cartucho de ácido palmitoleico. A continuación, use el micromanipulador para maniobrar el cartucho hacia la preparación mientras lo apunta a la cabeza. Coloque la punta del cartucho apuntando directamente a la antena desde una distancia de aproximadamente 4 milímetros. El cartucho también debe estar aproximadamente 1 milímetro por encima de la corredera.
El cartucho puede estar estrechamente bordeado por los electrodos y la corredera. Idealmente, debe estar al menos a cuatro milímetros de cualquiera de los electrodos. Para la estimulación, configure el controlador de flujo de odorante en ráfagas de 500 milisegundos y use un caudal de 500 mililitros por minuto. Para cada ráfaga de estímulo, registre la actividad eléctrica durante 10 segundos.