Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:59 min. • July 8th, 2025
Asegure un corte de cuña de cerebro de ratón transgénico en una cámara de grabación perfundida con aCSF oxigenado.
El lado de cuña más grueso contiene la raíz del nervio auditivo y el núcleo coclear, incluidas las células T-estrelladas y tupidas globulares.
El lado más delgado contiene el núcleo medial y ventral del cuerpo trapezoidal con neuronas olivocochleares mediales fluorescentes.
Localice microscópicamente la raíz del nervio auditivo y coloque un electrodo estimulante sobre ella.
Identifique una neurona olivocochlear medial fluorescente y avance una pipeta de registro hacia ella.
Parchee la neurona para lograr una configuración de célula completa y registrar su actividad eléctrica.
Aplicar pulsos eléctricos a la raíz del nervio auditivo, activando las células del núcleo coclear.
Las células estrelladas T activadas liberan neurotransmisores excitadores a las neuronas olivocochlares mediales.
Sin embargo, las células tupidas globulares activan vías inhibitorias, liberando neurotransmisores inhibidores a las neuronas olivocochleas mediales.
La integración de las señales excitadoras e inhibitorias da como resultado corrientes postsinápticas, lo que confirma la actividad neuronal dentro del corte.
Para configurar el corte de cuña para el análisis electrofisiológico, coloque la muestra en una cámara de registro que se perfunde continuamente con 35 grados Celsius aCSF y estabilice el corte. Usando la óptica DIC, concéntrese en la raíz del nervio auditivo en el lado grueso de la rebanada y use un micromanipulador para mover el electrodo estimulante de tungsteno bipolar a la raíz del nervio auditivo y suavemente en la superficie del tejido.
Mueva el campo de visión al núcleo ventral del cuerpo trapezoide en el lado delgado y seleccione una neurona olivocochlear medial como objetivo para la electrofisiología de pinza de parche bajo epifluorescencia utilizando un filtro de emisión de 561 nanómetros. Llene una pipeta de registro con la solución interna adecuada para el experimento propuesto y, bajo óptica DIC, parche y registre desde la neurona olivocochlear medial en la configuración de célula completa.
Ajustar la amplitud de estimulación eléctrica de la raíz nerviosa auditiva para obtener eventos postsinápticos consistentes en la neurona olivocochlear medial. Luego, ejecute protocolos de estimulación apropiados para observar corrientes sinápticas evocadas en las neuronas olivocochleares mediales.