Registro de las respuestas sinápticas de CA3-CA1 en un corte de hipocampo de rata

Coloque un corte de hipocampo de rata en una configuración de electrofisiología.

Coloque los electrodos estimulantes en la capa del estrato radiatum de la región CA1 del hipocampo, que recibe proyecciones axonales de las neuronas CA3.

Coloque un electrodo de registro cerca de las dendritas apicales CA1.

Coloque otro electrodo de registro en la capa del estrato piramidal.

Tras la estimulación, las proyecciones axonales CA3 se despolarizan y generan potenciales de acción, liberando neurotransmisores excitadores.

Estos neurotransmisores se unen a las dendritas apicales CA1 postsinápticas, induciendo una afluencia de iones positivos y despolarización de la membrana, denominada potencial postsináptico excitador o EPSP.

Las medidas del electrodo de registro sumaron los EPSP de las dendritas apicales: el campo EPSP o fEPSP. Una vez que se obtienen señales fEPSP estables, baje los electrodos y haga una breve pausa.

Aplique un rango de intensidades de estimulación para determinar la relación entrada-salida con la pendiente fEPSP, luego seleccione y aplique una intensidad específica basada en la pendiente.

El segundo electrodo de registro mide los potenciales de acción combinados de los cuerpos celulares neuronales CA1, generando picos de población.

En experimentos de captura y etiquetado sináptico, bajo el microscopio, coloque los dos electrodos estimulantes en el estrato radiatum de la región CA1 para estimular las fibras colaterales de Schaffer y un electrodo de registro en la región dendrítica apical de CA1 a medio camino entre los electrodos estimulantes para registrar las respuestas fEPSP.

Coloque otro electrodo de registro en la capa del estrato piramidal para registrar el pico de población. Cuando todos los electrodos toquen el corte, realice una estimulación de prueba para garantizar que se pueda obtener una señal EPSP de campo adecuada en ambas entradas.

Una vez que se obtiene una señal fEPSP adecuada, con cuidado, baje los electrodos unas 200 micras más usando las perillas de movimiento fino de los manipuladores, luego, espere 20 minutos para que se recupere el corte. Después de eso, determine la relación entrada / salida midiendo la pendiente del campo EPSP en un rango de intensidades de corriente de 20 microamperios a 100 microamperios.

Luego, para cada entrada, establezca la intensidad de estimulación que evoca el 40% de la pendiente máxima del campo EPSP como estímulos constantes a lo largo del experimento. Después de 15 a 20 minutos, comience a registrar la línea de base.

Registre una línea de base estable de al menos 30 a 60 minutos antes de la inducción de LTP/LTD.