Detección de respuestas fisiológicas de neuronas sensoriales en Drosophila

Coloque una Drosophila melanogaster modificada genéticamente anestesiada de lado en un cubreobjetos.

Extienda sus patas delanteras y asegúrelas para exponer los segmentos tarsianos.

Estos segmentos tienen neuronas gustativas que expresan complejos indicadores de calcio que emiten fluorescencia en forma unida al calcio.

Dibuja una barrera hidrofóbica alrededor de la mosca para retener la solución.

Deje que la mosca se recupere y superponga una solución salina tamponada sobre los segmentos tarsales expuestos para humedecerlos.

Bajo un microscopio confocal, observe los segmentos tarsianos y obtenga imágenes de las neuronas gustativas a varias profundidades para obtener una fluorescencia previa a la estimulación.

Agregue una solución de estimulación que contenga ligandos lipofílicos en el segmento.

Estos ligandos se unen a los receptores de las neuronas gustativas, iniciando vías de señalización y desencadenando la apertura de los canales de calcio.

Esto permite que los iones de calcio del líquido extracelular ingresen al citoplasma y se unan a los complejos indicadores de calcio, lo que resulta en una emisión de fluorescencia.

Cuando se observa nuevamente, un aumento en la fluorescenc