Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:18 min. • July 8th, 2025
Comience con un corte de cerebro de rata que contenga la región de la neurona diana conectada con un axón sensible a la luz de una región cerebral diferente.
Coloque la rebanada en la cámara de grabación sumergida y asegúrela con un anclaje de rebanada.
Bajo un microscopio, localice la capa deseada e identifique la neurona piramidal objetivo.
Levante el objetivo del microscopio para crear un menisco con la superficie de la corte.
Baje una micropipeta de vidrio llena de solución de registro intracelular en este menisco.
Toque la célula piramidal identificada con la punta de la pipeta para crear una hendidura en la membrana.
Aplique succión para formar un sello.
Aumente la succión hasta que la membrana se rompa, estableciendo una configuración de célula completa.
Usando una fuente de luz montada, aplique pulsos de luz a la rebanada.
Estos pulsos de luz desencadenan un potencial de acción en el axón sensible a la luz, liberando neurotransmisores en la hendidura sináptica.
Registre las respuestas de la neurona piramidal a estas liberaciones para analizar la eficiencia sináptica.
Para la identificación de la célula diana, coloque el corte en la cámara de registro e inmovilícelo con un anclaje de corte. Con bajo aumento, utilizando iluminación infrarroja, navegue hasta la capa 5 de LEC. Luego, cambie al objetivo de inmersión en agua de gran aumento e identifique las neuronas piramidales.
Marque la posición de la celda en el monitor con cinta adhesiva. A continuación, para formar una pinza de parche de células completas, fabrique una micropipeta de vidrio de borosilicato y llénela con una solución de registro intracelular. Coloque la micropipeta llena en el soporte del electrodo y aplique presión positiva soplando con fuerza en una boquilla conectada al puerto lateral del soporte del electrodo.
Levante el objetivo del microscopio de modo que se forme un menisco e inserte el electrodo en el menisco hasta que se pueda ver en el microscopio. Abra la ventana de prueba de sellado y determine si la resistencia de la pipeta es de tres a cinco megaohmios. Luego, toque la célula identificada con la punta de una pipeta, lo que dará como resultado una hendidura en la membrana celular.
A continuación, aplique presión negativa por succión en la boquilla, aumentando la resistencia de la pipeta. Continúe aplicando presión negativa gradualmente hasta que la membrana celular se rompa, lo que da como resultado transitorios de capacitancia de toda la celda. Para ingresar a la configuración de pinza de corriente, use un LED montado dirigido a la trayectoria de luz del microscopio con cubos de filtro y óptica adecuada, y aplique pulsos de luz al corte a través del objetivo de 40x. Entregue trenes de múltiples pulsos de luz a 5 Hertz, 10 Hertz y 20 Hertz para investigar las propiedades de liberación presináptica.