Carga y descarga de colorantes FM mediada por microelectrodos en células nerviosas de larvas de Drosophila
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:43 min. • July 8th, 2025
Comience con larvas de Drosophila, con fibras musculares y nerviosas expuestas sumergidas en una solución que contiene vesículas de tinte de membrana fluorescente o tinte FM.
El colorante FM se une a los lípidos de la membrana celular, formando una capa fluorescente sobre ella.
Con una unidad de micromanipulador, coloque la punta del microelectrodo de succión bajo un microscopio.
Concéntrese en las fibras nerviosas y el microelectrodo.
Use presión negativa para succionar un bucle de la fibra nerviosa en el microelectrodo.
Aplique pulsos de corriente para estimular la fibra nerviosa.
Esto desencadena la unión neuromuscular, donde una neurona motora se conecta a una fibra muscular, para iniciar la endocitosis de vesículas sinápticas.
Durante este proceso, la célula envuelve la membrana recubierta de tinte FM para formar vesículas endocíticas teñidas, ideales para visualizar etapas presinápticas de neurotransmisión.
Lave el tinte FM y reemplace la solución externa.
Aplique pulsos de corriente para descargar las vesículas teñidas con tinte FM de la célula.
Para la estimulación eléctrica, prepare una pipeta de succión con el extractor de microelectrodos para obtener el tamaño de cono y
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