Registro de electrofisiología optogenética de células con canales iónicos dependientes de la luz

Coloque un cubreobjetos que contenga células renales embrionarias que expresen canales iónicos dependientes de la luz y una proteína indicadora fluorescente en una cámara de medición aplicada con silicio. Ciérralo y añade un búfer externo.

Coloque esta cámara bajo un microscopio. Coloque un electrodo de baño lleno de agar. Perfunda con un tampón para eliminar los medios residuales y las células muertas.

Usando un filtro de fluorescencia, identifique y enfoque la célula objetivo.

Conecte una pipeta de parche a un micromanipulador. Aplique presión para evitar obstrucciones y acérquese a la celda.

Coloque la pipeta cerca de la célula y libere presión positiva para formar un parche de membrana en la punta.

Después de formar el parche de membrana, aplique presión negativa para romper la membrana.

Aplique una luz de una longitud de onda específica para abrir los canales iónicos. El movimiento de los iones se registra como cambio de voltaje por el electrodo.

Para empezar, selle la cámara de medición con silicona para evitar fugas del tampón externo. Luego, coloque un cubreobjetos en la cámara y ciérrela. Llene la cámara cuidadosamente con tampón extracelular para evitar que las células se